论文部分内容阅读
脂质代谢异常,主要表现为高胆固醇水平、高甘油三酸酯水平和低高密度脂蛋白胆固醇水平,与某些心血管疾病、癌症和代谢性疾病的发生密切相关。目前用于脂质代谢紊乱治疗的方法有一些局限性:或短期效果尚好但长期难以坚持,或有造成人体器官伤害的副作用,或费用昂贵。因此,找到具有减脂效应的天然无毒产物能产生重大的社会效益。大量动物实验和流行病学实验表明,绿茶中含有的儿茶素（特别是表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG））和咖啡因可增加生物能量消耗,调节脂质代谢,具有抗肥胖作用。一些研究报道饮用茶减轻体重,减少体内的总脂肪百分比和内脏、皮下脂肪重量以及血浆中总胆固醇的含量;但是另有一些研究未观察到这些效应;结果的不一致可能与不同茶叶中生物活性成分的含量及占比不同有关。目前关于EGCG和咖啡因的单独减脂效应研究颇多,但是关于两者的联合作用研究较少,而且剂量配比设定差别较大,由此影响到对两者联合效应作用的判定。秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans,C.elegans）在实验研究中容易培养、操作,最重要的是脂肪代谢通路与人类的相似,因此可作为EGCG和咖啡因联合影响脂质代谢研究的模式生物。目的:探究EGCG、咖啡因单独及两药联用对正常生理状态以及高糖应激状态下的C.elegans体内脂肪代谢的影响,为EGCG和咖啡因应用于脂质代谢紊乱控制提供依据。方法:通过急性毒性试验获得研究EGCG、咖啡因减脂效应的适宜浓度。采用2×3析因设计,将C.elegans分为9组,分别在正常生理状态与高糖应激状态下探讨EGCG和咖啡因的减脂效应。在20℃,将同步化的L4期C.elegans分别暴露于实验组和对照组溶液24 h。用尼罗红染色C.elegans,酶标仪测荧光强度;用甘油三酯和胆固醇测定试剂盒检测C.elegans体内的甘油三酯和胆固醇水平。阳性对照为145μg/m L奥利司他处理的C.elegans。结果:1.EGCG、咖啡因单独及联合作用的急性毒性试验结果EGCG、咖啡因单独作用对C.elegans的24 h LC50分别为1.58 mM、69.31 mM。与对照组（0 m M EGCG+0 m M咖啡因）相比,EGCG与咖啡因联合作用组（0.78 m M+48 m M,1.58 m M+48 m M）的C.elegans死亡率明显增加,析因分析显示EGCG和咖啡因联合致C.elegans死亡具有协同效应。2.EGCG、咖啡因单独及联合作用对正常状态C.elegans脂质代谢的影响（1）EGCG、咖啡因单独作用对C.elegans脂质代谢的影响与对照组（0 m M EGCG或0 m M咖啡因）相比,0.1、0.2 m M EGCG处理组以及10、20和30 m M咖啡因处理组C.elegans的脂质荧光强度明显变弱,甘油三酯和胆固醇水平下降（均p＜0.05）。（2）EGCG和咖啡因联合作用对C.elegans脂质代谢的影响与对照组（0 mM EGCG+0 mM咖啡因）相比,EGCG与咖啡因联合作用组（0.1 m M EGCG+0.5 m M咖啡因、0.1 m M EGCG+20 m M咖啡因、0.2 m M EGCG+0.5 m M咖啡因和0.2 m M EGCG+20 m M咖啡因）的C.elegans脂质荧光强度明显变弱,甘油三酯和胆固醇含量显著下降（均p＜0.05）。析因分析发现EGCG和咖啡因联合给药对减少C.elegans肠道脂质的生成及体内甘油三酯的含量具有协同效应（p＜0.05）,对胆固醇水平的改变不存在交互作用（p＞0.05）。（3）EGCG、咖啡因联合作用对高糖应激状态下C.elegans脂质代谢的影响高浓度100 mM葡萄糖能诱导肥胖,比较空白组、肥胖组（100 mM葡萄糖）和联合作用组（100 m M葡萄糖+EGCG+咖啡因）C.elegans发现,肥胖组C.elegans肠道脂质荧光强度和体内甘油三酯含量明显升高,胆固醇水平无明显变化。EGCG与咖啡因联合作用组均能使C.elegans肠道脂质荧光强度、体内甘油三酯含量和胆固醇水平降低。析因分析发现EGCG和咖啡因联合给药对高糖应激状态下C.elegans脂质荧光强度和甘油三酯含量的减少存在协同效应（p＜0.05）,对胆固醇的减少不存在交互效应（p＞0.05）。结论:1.在正常生理状态下,EGCG、咖啡因单独作用或联用可减少C.elegans脂质生成、甘油三酯含量和胆固醇水平。两者联用对减少C.elegans脂质生成和甘油三酯水平呈现协同作用,未发现对胆固醇的减少效应有交互作用。2.高糖刺激的C.elegans体内脂质生成增多,甘油三酯含量增加,但胆固醇含量未见明显改变。EGCG、咖啡因联用协同减少高糖诱导的脂质生成和甘油三酯增加。