【摘 要】
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高血压是心血管疾病的主要诱因,而心血管疾病是全球导致死亡人数最多的疾病。相较于常用降压药的副作用,食源性降血压肽因其来源天然且无毒副作用等优点而被大众普遍接受,且需求量日益增加。高血压的作用机理错综复杂,通路之间互相影响,其中人体最主要的高血压调节系统为肾素-血管紧张系统（renin-angiotensin system,RAS）。大米作为我国常见主食,营养价值较高,其中的蛋白质的功能特性较好,具
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（3197160311）；
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高血压是心血管疾病的主要诱因,而心血管疾病是全球导致死亡人数最多的疾病。相较于常用降压药的副作用,食源性降血压肽因其来源天然且无毒副作用等优点而被大众普遍接受,且需求量日益增加。高血压的作用机理错综复杂,通路之间互相影响,其中人体最主要的高血压调节系统为肾素-血管紧张系统（renin-angiotensin system,RAS）。大米作为我国常见主食,营养价值较高,其中的蛋白质的功能特性较好,具有低抗元性、抗氧化、降血压等生物活性,常用于特殊人群与婴幼儿食品的开发。我国顺德地区传统米酒,采用纯大米发酵,产量高、市场广。伴随而来的是其副产物量也大。米酒糟酸性高,不易储存等特点,若随意排放造成环境污染。目前多数米酒糟被就近出售,烘干后作为饲料,应用范围狭隘。大米经发酵后,其中的部分蛋白被转化为多肽,是很好的开发新型多肽的原料。如果使米酒糟得到高值化利用,不仅可以为米酒副产物提供新的开发思路,带来经济效益,同时还能减轻环境压力,废物利用,形成双赢的局面。本课题拟利用顺德红荔酒厂发酵后所剩米酒糟水,采用三次反相高效液相色谱法,收集色谱峰并浓缩得到纯度较高的肽组分,然后利用MOLDI-TOF-MS鉴定其结构。合成大米蛋白源ACE抑制肽,并对其底物类型、消化稳定性、抑制模式等性质进行研究。主要研究结果如下:1)评价了顺德酒厂米酒糟水的理化性质,酒糟含水量87.27%±0.37,凯氏定氮法测得其蛋白含量为18.16%±0.47,凝胶色谱测得其分子量分布在50-3 KDa,初始ACE抑制活性为浓度在1 mg/m L时,抑制率达64.97%;2)采用反向高效液相色谱技术,从米酒糟中分离纯化出两种高活性ACE抑制肽H5、H6,IC50分别为280.00±5.77μg/m L和143.33±6.67μg/m L;3)通过高分辨质谱与氨基酸测序仪（PPSQ）两种手段,鉴定两种多肽的一级结构分别为H5:Leu-Ile-Ile-Pro-Gln-His、H6:Leu-Ile-Ile-Pro-Glu-His。两者抑制剂类型皆为常规型抑制剂,与ACE作用前后活性不改变;对胃蛋白酶及胰蛋白酶具有良好稳定性,具有开发成为体内降压活性产品的潜力;研究其抑制动力学,探讨了降血压机理,H5、H6均为混合型抑制,与酶的结合属竞争性与非竞争性相结合的竞争模式;4)通过数据进行比对后,H5有相对应的大米蛋白,根据蛋白序列增减碳端或氮端氨基酸后,合成后检测活性发现ACE抑制活性骤降,说明分离纯化的降压肽序列已经为最小活性中心;5)通过分子对接模拟,探索多肽与ACE酶的作用过程,发现两者均可与ACE形成氢键与离子键;H5可与Glu143形成离子键,H6可与ACE的活性中心Zn2+离子形成螯合,并与其余氨基酸位点形成氢键等结合。
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