【摘 要】
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目的本研究检测分析了RNA解螺旋酶DEAD-Box5（DDX5）在肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达水平及与肝癌的临床病理学特征之间的相关性,阐明了DDX5在肝细胞癌发生发展中的作用及机制,初步探讨了DDX5在HCC诊断和治疗中的潜在临床应用价值。方法本研究利用TCGA数据库预测DDX5在肝癌组织与正常组织的m RNA表达量及差异,并通过定量PCR技术检测
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（81572310）；
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目的本研究检测分析了RNA解螺旋酶DEAD-Box5（DDX5）在肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达水平及与肝癌的临床病理学特征之间的相关性,阐明了DDX5在肝细胞癌发生发展中的作用及机制,初步探讨了DDX5在HCC诊断和治疗中的潜在临床应用价值。方法本研究利用TCGA数据库预测DDX5在肝癌组织与正常组织的m RNA表达量及差异,并通过定量PCR技术检测DDX5的m RNA水平,利用肝细胞癌组织芯片（TMA）,经免疫组织化学技术（IHC）检测DDX5蛋白在肝癌组织及癌旁组织中的表达其情况并分析差异,进一步分析DDX5蛋白与患者临床病理学特征及患者生存期的相关性。在体外实验方面,我们通过构建敲减DDX5基因的稳转肝癌细胞株,利用Transwell、CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验等实验技术检测DDX5基因敲减对细胞增殖、迁移及侵袭能力的作用,利用蛋白质免疫印迹方法检测敲减DDX5基因对细胞上皮间质转化（EMT）的影响。最后,我们通过分析KEGG数据库预测DDX5基因调控HCC发生发展潜在的信号通路,并利用蛋白免疫印迹方法进行验证。结果1.肝癌组织中的DDX5在m RNA水平和蛋白水平均呈显著高表达。2.肝癌组织中的DDX5的表达水平与肿瘤大小（p＜0.001）、淋巴结转移（p=0.013）)、远处转移（p=0.006）、肿瘤分化程度（p＜0.001）及TNM分期（p=0.001）等显著相关,而与年龄、性别、肝硬化情况等因素无统计学差异。3.Kaplan-Meier生存分析显示,DDX5与肝癌患者的无病生存期（DFS,p=0.016）和总生存期（OS,p=0.032）显著相关。4.细胞迁移、侵袭实验发现,抑制DDX5基因的表达显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭能力。Western blot结果显示,敲低DDX5基因后,可抑制肝癌细胞的EMT过程。5.CCK8细胞增殖实验和平板克隆形成实验结果表明抑制DDX5基因的表达明显抑制肝癌细胞的增殖能力。6.KEGG数据库显示DDX5在肝癌中明显富集PI3K/Akt通路（NES=1.77,p=0.002）,Western blot显示敲低DDX5后Akt及p-Akt的表达量明显降低（p＜0.05）。结论DDX5的转录及翻译水平在肝癌中均呈显著高表达,敲减肝癌细胞中的DDX5基因表达,可以显著抑制肝癌细胞的增殖、侵袭转移能力,其机制与DDX5参与HCC的EMT过程并调控Akt信号通路有关,这提示DDX5基因与肝细胞癌的发生发展密切相关,DDX5基因是影响肝癌患者生存的独立预后因子。
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