【摘 要】
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背景缺血性卒中是指由于各种原因所致脑部血液供应障碍,导致局部脑组织出现缺血、缺氧性坏死,而出现相应神经功能缺损的一类临床综合征,是我国最常见的卒中。伴随着干细胞技术日益成熟,目前干细胞移植是缺血性卒中治疗领域的一个新兴方法。骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）是骨髓来源的非造血间质细胞,能够分化成多种类型的细胞,移植到梗死部位可以达到
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背景缺血性卒中是指由于各种原因所致脑部血液供应障碍,导致局部脑组织出现缺血、缺氧性坏死,而出现相应神经功能缺损的一类临床综合征,是我国最常见的卒中。伴随着干细胞技术日益成熟,目前干细胞移植是缺血性卒中治疗领域的一个新兴方法。骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）是骨髓来源的非造血间质细胞,能够分化成多种类型的细胞,移植到梗死部位可以达到细胞替代、功能重建以及神经修复等治疗效果。然而,BMSCs由于梗死部位微环境不良导致存活率较低。缺氧预处理（Hypoxic preconditioning,HP）可促进移植细胞的再生能力,增加其治疗效益。目的本研究用线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉构建缺血性脑损伤大鼠模型,针对HP-BMSCs是否对缺血性脑损伤模型有治疗作用进行研究探讨。方法1.原代培养BMSCs与HP:将原代BMSCs传代培养,采用P3代进行移植,将BMSCs放置在缺氧小室中进行HP,缺氧24 h后,更换新鲜的完全培养基,培养箱中复氧1 h后收集细胞备用。2.实验动物分组:48只雄性SD大鼠,体重约（240±20）g,随机进行假手术干预及插入线栓构建模型,并分别命名为:假手术组（Sham）和模型组（Middle cerebral artey occlusion,MCAO）,通过神经功能缺损评分（Zea-Longa）和TTC染色测脑梗死面积来检验造模成功,再将造模成功的MCAO组分为:注入无菌PBS的缺血再灌注组（Ischemia-reperfusion,I/R）、注入正常的骨髓间充质干细胞组（N-BMSCs）、注入缺氧预处理的骨髓间充质干细胞组（HP-BMSCs）,然后根据细胞移植后取材时间点（7、14 d）不同,将每组再随机分为2个亚组（n=6）。3.大脑中动脉阻塞模型（MCAO）构建:用线栓阻塞大鼠左侧大脑中动脉,缺血90 min后拔出线栓再灌注24 h。4.细胞移植:缺血再灌注24 h后,选出Zea-Longa评分为1-3分大鼠,局部注射细胞。5.Zea-Longa评分:构建MCAO模型24 h与细胞移植7、14 d进行评分,评分为0～4分,分数越高,说明神经功能缺损程度越严重。6.TTC染色:构建MCAO模型24 h及细胞移植7、14 d断头取脑,进行TTC染色,计算脑梗死面积比。7.TUNEL法:石蜡切片进行固定、通透、连接标记,镜下观察细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率。8.尼氏染色:在7、14 d将大鼠进行心尖灌流、包埋、制成石蜡切片,按照说明书进行染色,观察缺血区神经元数目。结果1.与Sham组相比,I/R组Longa评分、脑梗死面积比及细胞凋亡率均明显升高,神经元数目下降（P＜0.001）。2.与I/R组相比,N-BMSCs组Longa评分、脑梗死面积比及细胞凋亡率均下降,神经元数目升高（P＜0.05）。3.与I/R组相比,HP-BMSCs组Longa评分、脑梗死面积比及细胞凋亡率均明显下降,神经元数目升高（P＜0.001）。4.与N-BMSCs组相比,HP-BMSCs组Longa评分、脑梗死面积比及细胞凋亡率均下降,神经元数目升高（P＜0.05）。结论BMSCs可改善缺血性脑损伤大鼠神经功能缺损症状,减少脑梗死面积,减少细胞凋亡,增加神经元数目,且HP-BMSCs改善效果优于BMSCs,对缺血性脑损伤大鼠有一定的治疗作用。
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