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近年来，基因工程、蛋白质工程和酶工程技术的迅速发展，以及分离纯化与检测手段的现代化，大大加快了发现新活性多肽的速度。研究与开发具有生物活性或药物活性的肽类，包括其前体肽片段的合成，已成为国际高新技术领域竞争的一个重要部分。 传统的肽类合成多采用液相化学合成，常用的包括碳二亚胺（DCC）法，混合酸酐法、酰氯法、叠氮物法等等，为多肽的合成提供了多种选择。后来在肽类液相化学合成的基础上又进一步发展产生了固相合成法。近三十年来酶促肽类合成又成为肽类合成领域的一大热门，随着非水酶学研究的深入与发展，酶在有机合成中的应用已日趋成熟，酶促合成法较化学合成法显示了许多优越性。最近几年，利用各种来源的蛋白水解酶，在非水介质中合成了各种功能短肽或其前体，其中包括一些具有营养功能的二肽和三肽，如低热量高甜度的甜味剂二肽、RGD三肽等。利用酶反应器，连续合成某些功能短肽已接近生产规模。 RGD是由精氨酸（Arg）、甘氨酸（Gly）、天冬氨酸（Asp）三个氨基酸组成的序列肽，是近几年来发现的具有生物活性的短肽序列之一。RGD序列肽能够竞争性抑制包括纤维蛋白Fib在内的各种粘附蛋白与血小板的结合，因而抑制了Fib与血小板的结合，使之在未来的临床应用中，具有较好的前景。它在内皮细胞的识别、抗血栓、抗血凝、抑制肿瘤，眼科诊治，治疗烧伤和皮肤溃疡等方面具有重要的作用。有关RGD肽类的合成也越来越显示其重要性和潜在市场价值。 本文的目的是对RGD三肽的合成工艺和路线进行初步的探讨，研究液相化学法（DCC法、混合酸酐法、氨解取代等）合成GD二肽、RGD三肽的实验过程中多种缩合剂、成酐试剂的作用机制，并研究多种因素影响肽合成的程度，积累相关数据，从而为RGD三肽的规模化制备提供理论基础和必要的技术常数。 本文以DCC法、混合酸酐法分别合成了HCl·Gly-Asp（oBzl）2二肽产物和Z-Arg（Tos）-Gly-Asp（oBzl）2三肽产物，以酰氯合成（氨解取代）法合成了Gly-Asp（NH2）2二肽产物；研究了多中因素包括反应时间、溶剂种类、底物配比以及碱加入量等对化学合成RGD序列肽的影响。碱的加入量具体指三乙胺和N-甲基吗啡啉，不同的反应中加入的目的和作用各不相同。 南京工业人学硕1论文 X外在实验过平小尝试不多 猪腴脂 二 醇（N。1。）和碘蛋〔酶（lryp劝；）分w今成一一j人广’物（Z八I·以1辽。幻Gly一八＊＊HN／＊以及＊一八＊以”IO叶一GI少八Sp（OI】ZI）Z》。川‘则几个成机】【5，彬．咧M家进计了初小的讨论，布点研究了他蚓时M、试剂下【·类，水加入量等因素对酶促反应的影响。山于实验室硬件的限制加＊时间有限，我们人。未得到T则＊山效果。酶促肽类合成的优协远没再发伸出来，这也处将我们个厂的 个亚点…三仆了一、 本义对实验结策进行了初步的理论分析，并做出了们对合理的解释，得到了一些有指导意义的结论。 门）化学法法合成RGD…二肽、三肽的实验小，考虑到低介电常数溶剂有不小)、司成少NJ财从规w］夕｛严二物否 夕＜多”L目U的气，阻n口厂N，N一二 小伙可丁区 服（DMI7）r山沸点较高丐 又／龟歹二物n后上划l带来于 人麻烦罗 同位 我们选择溶胶州Z较转户叫氢吹 响 （1’ll＊为溶产，而没在选择港只能力较女l’IV N，N一l： 111椎［II酚JjR（DMI。），IIYt［1了较好的效果。 （2）混合酸阶法制各C＊－一二肌的实验中，为了有利l复合物的生成，最好采）刊于少含有一个甲基的叔)j安。作者认为N一甲基吗丁啡咐因为氧原子的吸电诱导使它只有弱的碱性，N上有甲基空piJ位阻小，不影响它与I。BuOCOCI成故。 门)1兀C法于混合酸雨法书他至了8＊cG！卜八＊ ＊B1)＊。雹W仲，为了3。儿’1＿：成＿二见，必须先脱去B。c基，川无水1－1O／乙酸乙酯溶液和＿二氟乙酸两种o法，别能于 公 ｝ 几 人 H。c1；【，可 用 ＊O／乙酸＊酣溶液。＊以 千 5IJCI＠Gly一ASpXOBZI )＊品休，便于重叠晶纯化，＊ 用三I氟＊酸得刁到晶体，所以我们选择IJCI的乙酸乙酯溶液作为脱BOC试剂。 （4）与＊＊C法、混合酸钙法相＊、氨解取代制备＊1卜AS叭＊H二。二月反应时问过长，操作步骤烦琐、但其最大的优势便是成木极低，收率相对较高； 门)＊＊C法、混合酸除法。氮解取代法三种方法对反应温度的要求都较高，都需要控制在0℃以卜，否则会发生消旋、重对。以及聚和反应，从而影，响产物的收率不恻没O （6）在酶促合成三肽的实验中，山于时间有限，我们在现有条件下对酶促合成反应’。I。几种因素的影响进行了初步探讨，实验井未得到较好的效果。猪胰脂肪酸（I’l’L）合成 ZAI·g（ToS）Gly－ASI，（NfIZ）2收率仅为 53．6％，胰蛋〔酶（tfyl，Sill） ”l 南京L业人学顺上论义大多成 Z一AI以阿lbsyGly 一AsP(O13ZI 人收二年为 42、8 9＊，【．IA／十多’物主王荣入林远没人将峋促瓜类合成的优势发批出来，这也处将我