目的:构建猪戊型肝炎病毒ORF3基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/ORF3,并在COS-7细胞中进行表达。通过肌肉注射与IL-2联合免疫Balb/C小鼠,检测其产生的免疫应答水平,以期望通过基因疫苗作用使小鼠对戊肝病毒产生免疫防御能力。方法:用PRIMER5.0软件设计引物,PCR扩增ORF3全基因,将PCR产物纯化后插入pcDNA3.1(+)载体,将重组质粒pcDNA3.1(+)/ORF3转化入感受态细胞DH5α进行大量复制。转染COS-7细胞,用免疫细胞化学和Westenrn-Blot验证其在真核细胞得到表达后,将重组质粒pcDNA3.1(+)/ORF3、对照空质粒pcDNA3.1(+)及生理盐水分组通过肌肉注射免疫6周龄Balb/C雌鼠,隔两周免疫一次,共免疫3次,第二周加白介素2辅佐免疫。初免后每隔2周采用ELISA间接法测定小鼠血清中抗ORF3 IgM抗体水平。通过PCR法检测小鼠肌细胞中ORF3基因的存在。结果:成功克隆了ORF3基因,构建了pcDNA3.1(+)/ORF3重组真核表达载体,重组质粒能在COS-7细胞内有效表达目的蛋白。小鼠接种pcDNA3.1(+)/ORP3核酸疫苗后能产生特异性IgM抗体。PCR检测ORF3基因可在小鼠肌细胞中存在。结论:(1)成功克隆了猪戊型肝炎病毒ORF3基因。(2)成功构建了pcDNA3.1(+)/ORF3真核表达载体且其能在真核细胞中表达。(3) pcDNA3.1(+)/ORF3核酸疫苗在小鼠体内可诱导产生免疫应答。(4) pcDNA3.1(+)/ORF3核酸疫苗接种Balb/C小鼠后能在肌细胞中存在。