珠母贝氨基多糖活性组分的研究

来源 :湛江海洋大学 广东海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hbzjl001
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本研究主要是在已有的研究基础上,以马氏珠母贝全脏器为原料,采用双酶水解和柱层析方法分离纯化其中的氨基多糖,并对其组成、性质和结构以及抗肿瘤生物活性进行了系统的研究。研究结果表明: 在珠母贝氨基多糖的粗提中,采用先加胰酶1.5[%],5C℃,pH8.0水解4h后,再加枯草杆菌中性蛋白酶0.8[%],50℃,pH7.0水解4h的水解工艺效果较好,水解率达89.2[%],氨基多糖粗品(CPG)得率为1.0[%],总GAG含量为33.3[%]。对珠母贝CPO采用了柱层析的方法进行纯化,CPG经DEAE-52纤维素离子交换柱层析可分为GAG-1和GAG-2两个级分。采用改良的MTT。法检测珠母贝CPG和经DEAE-52纤维素柱层析纯化级分GAG-1、GAG-2对体外肿瘤细胞(HL-60细胞)的抑制作用,结果表明: 珠母贝CPG和级分GAG-1、GAG-2均有一定的抗肿瘤活性,对HL-60细胞的抑制率分别可达到54.6[%]、50.0[%]和35.4[%];且能增敏抗肿瘤药物5-Fu的抑瘤作用,能使5-Fu的抑制率分别增加13.4[%]、37.8[%]和21.2[%],其中经DEAE-52纤维素离子交换柱层析纯化级分GAG-1的抗肿瘤活性明显高于级分GAG-2,为主要的活性成分。再将级分GAG-1和GAG-2经Sephadex G-75分子筛凝胶柱层析进一步纯化分离,得到GAG-1-1、GAG-2-1和GAG-2-2三个主要级分,经琼脂糖凝胶电泳分析表明其相对纯度较高。对珠母贝GAG的组成、性质和结构的研究结果表明: 珠母贝氨基多糖是一类组成特殊的、以氨基己糖为主要组成的氨基多糖。GAG-1-1由氨基葡萄糖和半乳糖组成,含少量的岩藻糖和硫酸基,经高效凝胶渗透色谱技术(HPGPC)检测其相对分子质量在27000~92000,组成呈现一定的不均一性;GAG-2-l由氨基己糖和半乳糖组成,含少量的岩藻糖和硫酸基,氨基己糖中氨基半乳糖含量相对较多,相对分子质量为l4000;GAG-2-2是由氨基己糖和少量己糖醛酸组成,氨基己糖中氨基半乳糖与氨基葡萄糖的比例接近1∶1,半乳糖、岩藻糖和硫酸基的含量均相对较少,相对分子质量为5600;红外光谱分析表明三个级分中均含有氨基多糖的-OH,-NH,-COO<->,-OSO<,3><->,C-O-C等特征基团。
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