【摘 要】
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该论文以广亲和品咱水稻(O.Sativa L.Cpslo17)材料,成功构建了一个高质量的核基因组cosmid文库,并以此文库为工具分离到一个位于广亲和主效应基因座S区的新克隆. 在基因组cosmid文库构建过程中,采用了几种改进的方法,以提高文库的质量:第一、从水稻黄化苗中提取细胞核,包埋后处理成Mb级DNA,用于部分酶切建主加,此法所得DNA片段很大,且较为纯净,DNA量也相当多.第二、对建c
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该论文以广亲和品咱水稻(O.Sativa L.Cpslo17)材料,成功构建了一个高质量的核基因组cosmid文库,并以此文库为工具分离到一个位于广亲和主效应基因座S<,5>区的新克隆. 在基因组cosmid文库构建过程中,采用了几种改进的方法,以提高文库的质量:第一、从水稻黄化苗中提取细胞核,包埋后处理成Mb级DNA,用于部分酶切建主加,此法所得DNA片段很大,且较为纯净,DNA量也相当多.第二、对建cosmid文库常用的两种同裂酶进行了比较,发现MboI切割水稻基因组DNA较Sau3AI随机,所以选用MboI进行部分酶切,以获得较好的结果.用PFGE分部部分酶切产物,加收33.5kb-48.5kb之间的片段,超滤浓缩后连接到载体SuperCos1中,包装,转染宿主XL1-Blue MR.第三、将整个文库10万多个克隆以三种不同方式(每孔一个菌、每孔二个菌和每孔若干个菌)转接入384孔板中培养、保存,克服了其他保存方式的弊端,使保存更安全,阳性克隆定位也容易.
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