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背景和目的食管癌是常见的恶性肿瘤之一。在中国食管鳞状细胞癌约占食管癌总数的90%,它发病率高,预后差,普遍化疗耐药,死亡率高,目前临床尚缺乏有效的治疗方法,因此急需更深入的了解它的发病机理,开发新的治疗方法。溶酶体相关膜糖蛋白 2A(Lysosome-associated membrane glycoprotein 2 iso form A precursor,LMAP2A),是分子伴侣介导的自噬作用中的关键蛋白之一,已有文献报道该蛋白参与多种肿瘤的形成和发展,但它在食管鳞状细胞癌中的作用尚不清楚。本文旨在研究LAMP2A对食管鳞癌细胞增殖,迁移和对顺铂敏感性的影响,通过体外功能实验研究LAMP2A在食管鳞癌发生发展中的作用,为食管鳞状细胞癌的靶向治疗提供新的思路。方法本研究首先用生物信息学方法分析溶酶体相关膜糖蛋白2在TCGA数据库和GTEx数据库中的食管癌样本中的表达情况。然后利用二代慢病毒包装系统(三质粒系统)建立LAMP2A敲低或者过表达的食管鳞癌细胞株,使用嘌呤霉素筛选阳性细胞,然后采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法(Western Blotting)分别在mRNA水平和蛋白水平鉴定LAMP2A的表达情况。其次,体外培养改造后的食管鳞癌细胞株,并探究LAMP2A对细胞增殖,迁移和克隆形成能力等恶性性状的影响。使用IncuCyte Zoom动态监测细胞增殖情况,划痕实验检测LAMP2A对细胞迁移能力的影响。平板克隆形成实验检测LAMP2A对细胞克隆形成能力的影响。同时,本研究还用顺铂处理改造后的食管鳞癌细胞,并用MTS法检测细胞活力,确定LAMP2A在食管鳞癌细胞对化疗药敏感性中的作用。结果1.GEPIA在线软件分析TCGA数据库和GTEx数据库中食管癌组织样本和对应的正常食管组织样本的结果表明,LAMP2在癌组织中的表达高于其在正常组织中的表达,而且高表达LAMP2的患者生存期更短。2.实时荧光定量PCR和Western Blotting的结果表明,用pLKO-shLAMP2A(敲低LAMP2A的慢病毒)感染KYSE150和KYSE510细胞后,LAMP2A在mRNA和蛋白水平的表达均明显降低;用FUB-LAMP2A(过表达LAMP2A的慢病毒)感染KYSE410细胞和KYSE180细胞后,LAMP2A在mRNA水平和蛋白水平的表达均显著升高,表达绿色荧光蛋白的细胞达到细胞总数的90%以上,即成功地构建了稳转细胞株。3.IncuCyte Zoom动态监测,划痕实验以及平板克隆形成实验的结果显示,敲低LAMP2A能够抑制KYSE150和KYSE510细胞的增殖,迁移和克隆形成能力;过表达LAMP2A促进KYSE410和KYSE180细胞的增殖和克隆形成能力,但仅提高了 KYSE180细胞的迁移能力,对KYSE410的迁移能力无明显影响。4.敲低LAMP2A提高KYSE150和KYSE510细胞对顺铂的敏感性;但过表达LAMP2A的KYSE410和KYSE180细胞对顺铂的敏感性无明显变化。结论1.LAMP2A促进食管鳞癌细胞的增殖,迁移与克隆形成。2.敲低LAMP2A可提高食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性。