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目的：(1)通过染毒动物实验,观察环境内分泌干扰物(environmental endocrine disruptor, EEDs)的抗雄激素活性及生殖毒性,复制其引致性腺发育不良的疾病模型。(2)在此疾病模型上,采用益肾填精中药治疗干预,验证中药对EEDs抗雄激素活性及生殖毒性的拮抗作用。(3)采用生物化学及分子生物学实验方法,从睾丸支持细胞功能角度研究并阐明EEDs抗雄激素活性的作用机制及中药对其的拮抗作用机制,为开发有效拮抗EEDs生殖毒性的中药制剂提供理论依据。方法：(1)以青春前期(21日龄)雄性SD大鼠为实验对象,选取具有代表性的EEDs——邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexylphthalate, DEHP)及氯氰菊酯(Cypermethrin, CYP)作为染毒物质。40只雄性青春前期SD大鼠随机分为对照组(喂饲玉米油)、DEHP染毒组(喂饲DEHP500 mg/kg)、CYP染毒组(喂饲CYP 80mg/kg)及联合染毒组(喂饲DEHP500 mg/kg+CYP 80mg/kg),每组10只。每日空腹给药,连续染毒4周。以睾丸下降时间、包皮分离时间、睾丸湿重、睾丸系数、血清睾酮水平、睾丸病理组织学改变、睾丸超微结构病变作为指标观察DEHP及CYP的抗雄激素活性及生殖毒性,复制其引致性腺发育不良的疾病模型。通过检测卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor, FSHR)、雄激素结合蛋白(androgen binding protein, ABP)、抑制素(inhibin,INH)、波形蛋白(vimentin, VIM)的基因与蛋白表达水平从睾丸支持细胞功能的角度探讨DEHP及CYP抗雄激素活性及其生殖毒性的作用机制。实验数据采用2×2析因方差分析,对比各组间的差异,通过交互图判断DEHP与CYP的交互作用。(2)在此性腺发育不良疾病模型采用益肾填精中药治疗干预。70只雄性SD大鼠随机分为对照组(喂饲玉米油)、DEHP染毒组(DEHP 500 mg/kg)、 CYP染毒组(CYP 80mg/kg)和联合染毒组(DEHP 500 mg/kg+CYP 80mg/kg),治疗组同时喂饲中药。每日空腹给药,连续染毒4周。以睾丸下降时间、包皮分离时间、睾丸湿重、睾丸系数、血清睾酮水平、睾丸病理组织学改变、睾丸超微结构病变作为指标,验证益肾填精中药对EEDs抗雄激素作用及其生殖毒性的拮抗作用。(3)采用生物化学及分子生物学实验方法,检测睾丸组织氧化应激水平,以及FSHR、ABP、INHB、VIM及过氧化物增殖受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARγ)的基因与蛋白表达水平。实验数据采用单因素方差分析,通过染毒组,治疗组及对照组的相互对比,从睾丸支持细胞功能的角度探讨益肾填精中药拮抗EEDs抗雄激素活性及生殖毒性的作用机制。结果：(1)与对照组相比,DEHP、CYP单独及联合染毒组睾丸重量、睾丸系数均显著降低,睾丸下降及包皮分离时间明显延迟,血清睾酮水平显著下降,睾丸组织的氧化应激水平显著亢进,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),各染毒组睾丸病理组织学及生殖细胞超微结构均可见不同程度的病变。睾丸支持细胞功能相关的基因与蛋白均出现不同程度的改变。各治疗组与染毒组相比,上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。(2) FQ-PCR方法检测显示DEHP及CYP单独及联合染毒睾丸支持细胞FSHR, ABP, INH及VIM的mRNA表达水平显著下调,PPARy的mRNA表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01),而益肾填精中药治疗干预组睾丸支持细胞FSHR、ABP、INH的mRNA表达水平显著上调, PPARy的mRNA表达水平显著下调(P<0.05或P<0.01)。(3)Western Blot方法验证,DEHP及CYP单独及联合染毒组睾丸支持细胞FSHR、ABP及INH的蛋白表达显著下调,PPARy的蛋白表达显著上调,而益肾填精中药干预组FSHR、ABP及INH的蛋白表达水平显著上调,PPARy的蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论：(1)通过染毒动物实验,我们成功地复制了青春前期大鼠由EEDs引致的性腺发育不良疾病模型。(2)DEHP及CYP均具有显著的抗雄激素活性及生殖毒性,并显著促进睾丸组织的氧化应激反应。DEHP对睾丸支持细胞具有显著毒性,可明显降低睾丸支持细胞功能相关的基因与蛋白表达,CYP对睾丸支持细胞的毒性作用较弱。二者联合染毒呈一定拮抗效应。(3)益肾填精中药对EEDs的抗雄激素活性及生殖毒性具有显著的拮抗作用。(4)益肾填精中药可保护睾丸组织显著减轻EEDs诱导的氧化应激损伤,抑制细胞凋亡,促进睾酮合成分泌,并可显著改善睾丸支持细胞功能,多水平、多靶点地发挥其对EEDs抗雄激素活性及生殖毒性的拮抗作用。