中国明对虾幼体对卵黄蛋白的利用研究

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本实验首次尝试用选择性沉淀法提纯中国明对虾的卵黄蛋白,并建立了EDTA-MgCl2提纯卵黄蛋白的方法。利用层析法(SephadexG-150,DEAE-Cellulose-52)大量提纯了中国明对虾卵巢中的卵黄蛋白,采用常规免疫方法,以纯化的卵黄蛋白作为抗原来免疫家兔,制备了卵黄蛋白的抗血清。并利用此抗血清进行对虾雌性蛋白的免疫学研究,通过免疫扩散和免疫印迹反应检测了抗血清的特异性。 利用卵黄蛋白抗血清的高特异性,建立了间接竞争酶联免疫吸附反应(ELISA)测定中国明对虾卵黄蛋白的方法。并确立了测定参数:抗血清与包被抗原的最佳工作浓度分别为1:10000和125ng/mL卵黄蛋白;最适检测范围为10~500ng/mL;批内变异系数为5.0%,批间变异系数为6.2%。 采用ELISA方法测定了中国明对虾卵及无节幼体时期卵黄蛋白含量的变化,卵黄蛋白含量一直呈减少的趋势,N3~4至N5~6期和N5~6至Z1期两个时期卵黄蛋白的消耗量最大,分别为1322ng/mL利1213ng/mL,占卵中卵黄蛋白总量的38.9%和35.7%,Z1期以后体内基本不含卵黄蛋白。 本文测定了中国明对虾无节幼体时期几种消化酶活力。试验结果表明,在中国对虾幼体发育过程中,四种消化酶活力表现出三种变化模式。在幼体发育初期,蛋白酶就具有活力,在N3~4、N5~6时期各个酶活力均有较大幅度的增长,这与中肠腺的分化程度有关。卵黄蛋白的分解吸收与消化酶的活性密切相关。
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