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目的：不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFA)是机体生命活动所不可或缺的组分,它非但是细胞膜的重要组成成分,并且各类不饱和脂肪酸呈现出不同的作用,介导机体的促炎或抑炎反应。然而对于其发生作用的分子机制还没有被很好地阐明,本研究通过观察其对免疫系统的重要参与者“树突状细胞”的调控作用的基础上探索其可能的分子机制。方法：1.前列腺素E2及E3对骨髓多能造血干细胞分化成树突状细胞的调控。(1)将骨髓细胞从C57BL/6小鼠的股骨和颈骨中冲出,收集细胞破红后计数,得到骨髓细胞的单细胞悬液。(2)以6×105每孔将细胞种入24孔板中。实验分为3组,第一组在无血清培养基中加入10ng/ml GM-CSF和1ng/ml IL-4,第二和第三组在此基础上分别添加50ng/ml PGE2或50ng／ml PGE3.每天半量换培养液,6天后将细胞吹起收集。(3)计数收集到的细胞,将细胞进行瑞氏染色,在高、低倍镜下拍摄细胞在分化过程中的形态变化。(4)流式检测经前列腺素诱导后CD11b+CD11c+树突状细胞的生成情况,以及Ly6G+CD11b+粒系MDSC细胞的比例,并计数其绝对数,检测前列腺素对于骨髓干细胞分化过程的调控。(5)Q-PC R检测收集后混合细胞和分选CDllc+DC的IL-10、IL-12、IDO、Arg-1以及COX-2的mRNA水平表达情况。(6)由于PPARγ在脂代谢调控中占有非常重要的地位,故我们检测了分别用50ng /ml PGE2和PGE3处理的骨髓干细胞0h、2h、6h、12h、24h时PPARγ的表达情况,探讨其在前列腺素调控中所起的作用。2.前列腺素E2和E3对成熟DC的调控作用。(1)小鼠骨髓细胞在使用GM-CSF以及IL-4诱导7天后,轻轻吹起上层细胞,收集后计数,将细胞以6×105/孔种入24孔板中,以不同种类和浓度前列腺素刺激24小时后,收集细胞进行下一步实验。(2)流式分析前列腺素处理后DC表面CD80、CD86和MHC-Ⅱ分子的表达情况。(3)Q-PCR分析不同浓度前列腺素处理组中IL-10、IL-12mRNA水平的表达。(4)在之前实验的基础上,以5Ong/ml前列腺素处理树突状细胞24h后,再以OVA全蛋白与树突状细胞孵育6小时,提呈抗原并活化C57BL/6与DO11.10(BALB/C背景)小鼠的F1代的CD4+T细胞(CD4+ T细胞事先经过磁珠分选并用荧光示踪染料CFSE标记),细胞活化、增殖3天后,流式分析不同组CD4+T细胞的增殖情况。(5)培养7天后的成熟树突状细胞经50ng/ml不同前列腺素处理过后,用OVA-Alexa488与其孵育2h,并且以4℃处理组为对照,流式检测DC细胞吞噬能力的变化。结果：(1)在骨髓干细胞向树突状细胞分化的过程中,如果添加前列腺素,无论是PGE2还是PGE3,都会使诱导后的细胞总数上升,并且瑞氏染色结果显示粒系细胞增多。流式细胞仪检测发现,与对照组相比前列腺素处理组DC的比例下调,粒系来源MDSC细胞比例上调；分泌的免疫抑制性细胞因子例如Arg-1、 IDO、IL-10等均上调。单独分选出CDllc+树突状细胞后定量分析,发现前列腺素处理组DC的免疫抑制型因子与COX-2基因均上调。上述的作用均为PGE2强于PGE3。(2) Western Blotting分析不同前列腺素处理组,不同时间段的PPARγ蛋白的表达,发现经前列腺素处理后的细胞2h后P PARy表达上调。说明前列腺素调控分化过程的作用中,PPARγ可能起了一些作用。(3)对于成熟的DC来说,较低浓度的PGE2 (50ng/ml)调控DC表达更高的CD80、 CD86和MHC-Ⅱ分子,而随着浓度的上升,这些分子的表达受到了抑制。与流式结果相一致,Q-PCR结果发现,在低浓度PGE2时,DC细胞的炎性因子IL-12表达上升而抑炎因子IL-10表达相对较低。综上所述,低浓度的PGE2可以使树突状细胞上调炎症状态,而高浓度时正好相反。(4)横向对比50ng/ml时PGE2和PGE3对树突状细胞的调控功能,发现在这一浓度下,无论是从表型还是从细胞因子分泌上,PGE2-DC的促炎效应显著强于PGE3-DC对比不同前列腺素对DC提呈以及吞噬功能的影响。结果发现提呈能力PGE2-DC要强于,相反,其吞噬能力弱于PGE3-DC结论：在诱导骨髓干细胞向DC分化的过程中,如果加入PGE2和PGE3后,DC的比PGE3-DC。例显著减少,粒系来源的细胞比例明显增高,而且,细胞呈现免疫抑制的状态,MDSC并且这一效应可能与以及PPARy-2上调有关。低浓度的前列腺素可以调控成熟树COX突状细胞上调共刺激分子,以及促炎细胞因子的表达,而在较高浓度的时候则出现抑制。对比相同浓度前列腺素处理的(50ng/ml)口PGE2-DC结果发现树突状细PGE3-DC,胞在经过PGE2处理过后,的抗原提呈能力要强于PGE3处理组,相反吞噬能PGE2-DC力则是强PGE3-DC于PGE2-DC。