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目的:
探讨人脐血间充质干细胞诱导分化为多巴胺(DA)能神经元的最佳条件及机制。
材料和方法:
1．人脐血间充质干细胞的培养与鉴定自首都医科大学附属天坛医院和友谊医院采集健康产妇分娩新生儿脐血32例，每例脐血30～60ml，采用密度梯度离心法对脐血进行分离纯化获取单个核细胞，并进行培养，MTT法检测细胞生长情况，通过流式细胞术对原代培养(P<,0>代)12d以及传代培养(P<,1>代)3d的脐血细胞的CD34(造血干细胞标志)、CD90(间质细胞标志之一)、CD166(间质细胞标志之一)的表达情况进行分析，同时，采用免疫细胞化学方法对P<,0>代、P<,1>代脐血细胞Nestin(巢蛋白，神经干细胞标志之一)的表达情况进行检测。
2．不同条件培养液的制备取新生SD大鼠(出生24h内)纹状体组织进行培养获取纹状体细胞和星形胶质细胞，同时取健康产妇分娩的羊膜组织进行分离培养获取羊膜上皮细胞，分别收集上述细胞培养时的上清培养液进行高速离心，并分别与HG-DMEM完全培养液按3/2(v/v)比例混合，即制备成大鼠纹状体细胞条件培养液(SCM)、大鼠星形胶质细胞条件培养液(SACM)和人羊膜上皮细胞条件培养液(ACM)。
3.人脐血间充质干细胞的诱导分化
3.1 P<,0>代脐血间充质干细胞的诱导分化
对P<,0>代脐血间充质干细胞进行细胞因子和/或化学因子和条件培养液诱导，具体分组为对照组、ATRA组、EGF+bFGF组、ATRA+EGF+bFGF组、大鼠SCM组、大鼠SACM组和人ACM组，诱导4d后终止。采用免疫细胞化学方法对诱导后细胞的TH(酪氨酸羟化酶)和DAT(多巴胺转运体)表达情况进行检测。
3.2 P<,1>代脐血间充质干细胞的诱导分化
对P<,1>代脐血间充质干细胞重点采用条件培养液进行诱导，具体分组情况为对照组、大鼠SCM组、大鼠SACM组和人ACM组，诱导4d后终止。采用免疫细胞化学和蛋白免疫印迹分析(Western-blot)法对诱导后细胞TH、DAT蛋白的表达情况进行检测。
结论:
1．人脐血干细胞是一种具有旺盛增殖能力的间充质干细胞，采用适宜的诱导方案可以获得一定数量的DA能神经元。
2．各条件培养液组的诱导结果优于化学因子和细胞因子组，这主要是由于条件培养液更接近DA能神经元分化的微环境，因此模拟细胞微环境能更有利于脐血干细胞的定向分化。
3．由于人羊膜上皮细胞条件培养液比大鼠纹状体来源的条件培养液更易于获得、制备和控制，因种属差异所产生的免疫排斥反应更小，在将来临床细胞替代治疗方面更具可行性。
4．本研究利用人羊膜上皮细胞诱导人脐血干细胞分化为DA能神经元，目前尚未见报道。