【摘 要】
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目的:本研究通过建立UUO大鼠模型,探讨清化固肾排毒方延缓肾纤维化作用的可能机制,以及对WNT信号通路的影响,为清化固肾排毒方抗肾脏纤维化作用进一步提供实验依据。方法:将96只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、洛丁新组及清化固肾排毒方高、中、低剂量组,除假手术组外,其余各组大鼠均采用单侧输尿管结扎手术方法（UUO）建立大鼠肾间质纤维化模型,术后各组分别予相应药物或生理盐水灌胃,每日1次。给药第7、
【基金项目】
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浙江省自然科学基金《基于WNT信号通路研究清化固肾排毒方干预肾络病的分子机理》（项目编号:H4H270003）；
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目的:本研究通过建立UUO大鼠模型,探讨清化固肾排毒方延缓肾纤维化作用的可能机制,以及对WNT信号通路的影响,为清化固肾排毒方抗肾脏纤维化作用进一步提供实验依据。方法:将96只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、洛丁新组及清化固肾排毒方高、中、低剂量组,除假手术组外,其余各组大鼠均采用单侧输尿管结扎手术方法（UUO）建立大鼠肾间质纤维化模型,术后各组分别予相应药物或生理盐水灌胃,每日1次。给药第7、14、21日后,各组大鼠禁食不禁水1天,各组分别取出6只进行处死,心脏取血检测血清尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）和肌酐（serum creatinine,SCr）、取手术侧肾组织做病理检测。2.通过Masson染色观察各组大鼠在不同时间的病理变化,使用免疫组化检测FN、Col-Ⅳ、TGF-β 1及WNT4在不同组别不同时间的肾组织的阳性染色表达。实时荧光定量PCR检测上述各项指标的mRNA在肾组织中的表达情况3.采用SPSS17.0软件对相关实验数据进行统计学处理,通过方差分析,计量资料均数用x±s表示。结果:1.成功建立UUO模型;2.Masson染色结果:在假手术组的大鼠有微量的蓝染组织,并没有见到明显的病理改变。在模型组,可以见到大量的蓝色胶原纤维,并且随着梗阻时间的延长,蓝色胶原纤维呈现明显增多的趋势,由此说明肾纤维化的程度是进行性加重的。（P＜0.05）。3.在本实验中,模型组大鼠的SCr、BUN结果与Sham组比较皆显著增高（P＜0.05）;中药高剂量组、中剂量组、低剂量组和洛丁新组的SCr、BUN结果与模型组比较,皆显著降低（P＜0.05）,且各治疗组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。4.在同一时间条件下,不同组别的大鼠24小时UP量差异无统计学意义（P＞0.05）。5.免疫组织化学染色结果:与Sham组比较,各造模组的大鼠肾组织TGF-β1、FN、Col-Ⅳ表达是显著增多的（P＜0.05）,且输尿管梗阻的时间越长,各指标程度也会随着加重;与模型组比较,中药各组、洛丁新组大鼠的TGF-β1、FN、Col-Ⅳ各项指标的阳性表达都明显降低（P＜0.05）,各治疗组各指标差异无统计学意义（P＞0.05）。WNT-4免疫组化结果显示:与Sham组比较,各造模组大鼠不同时间的肾组织WNT-4的阳性表达明显增多（P＜0.05）,各造模组中肾组织可见WNT-4不同程度的阳性表达,并在造模后持续升高至21天。中药各组与洛丁新组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。6.实时荧光定量PCR结果:与Sham组比较,各造模组大鼠肾组织TGF-β1mRNA、FN mRNA、Col-Ⅳ mRNA表达明显增多（P＜0.05）,随着输尿管梗阻时间延长,各指标程度加重;中药各组、洛丁新组大鼠的TGF-β 1mRNA、FN mRNA、Col-Ⅳ mRNA表达比模型组降低（P＜0.05）。WNT-4 mRNA结果显示:各造模组大鼠比Sham组肾组织Wnt-4 mRNA表达增高（P＜0.05）,并且在梗阻后WNT-4 mRNA表达量持续升高至第21天（P＜0.05）;中药各组、洛丁新组大鼠WNT-4 mRNA表达比模型组显著降低（P＜0.05）。结论:1.清化固肾排毒方可以减少UUO大鼠尿蛋白的丢失,能够降低大鼠血清BUN、Scr水平,一定程度改善肾功能及肾脏病理,延缓肾纤维化程度。2.清化固肾排毒方能够抑制大鼠肾脏TGF-β1、FN、Col-Ⅳ的表达,其作用机制是通过下调TGF-β1、FN、Col-Ⅳ的表达,从而抑制ECM的积聚,延缓肾纤维化的发展。3.WNT信号通路的激活,加重了 UUO大鼠肾纤维化的进程,清化固肾排毒方能延缓肾纤维化的发展,与其抑制WNT信号通路有关。
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