【摘 要】
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目的:探讨脂肪间质干细胞来源的胞外囊泡（Adipose-derived mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles,ADSC-EVs）对卵巢癌ID8细胞株生物功能的影响及其可能机制。方法:采用酶消化法分离获得ADSCs,利用其形态特征、成骨和成脂多向分化能力以及流式细胞术表面标记检测对ADSCs进行鉴定;采用超速离心法分离ADSC-EV
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目的:探讨脂肪间质干细胞来源的胞外囊泡（Adipose-derived mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles,ADSC-EVs）对卵巢癌ID8细胞株生物功能的影响及其可能机制。方法:采用酶消化法分离获得ADSCs,利用其形态特征、成骨和成脂多向分化能力以及流式细胞术表面标记检测对ADSCs进行鉴定;采用超速离心法分离ADSC-EVs,并通过透射电子显微镜、纳米粒径分析和Western-blot进行鉴定;采用不同浓度（20μg/m L、40μg/m L）ADSC-EVs分别预处理卵巢癌细胞株ID8,通过平板克隆实验检测ADSC-EVs对ID8细胞增殖能力的影响;划痕实验和Transwell实验分别检测ADSC-EVs对ID8细胞迁移能力的影响;Western-blot检测ID8细胞上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）和AKT相关蛋白的表达。通过裸鼠荷瘤实验综合分析ADSC-EVs（40μg/m L）对ID8细胞在体内增殖能力的影响。通过平板克隆实验检测ADSC-EVs（40μg/m L）对预先用AKT抑制剂AZD5363（20μmol/m L）处理后的ID8细胞增殖能力的影响;类似地,划痕实验和Transwell实验分别检测ADSC-EVs对AZD5363预处理后的ID8细胞迁移能力的影响;最后,Western-blot检测ADSC-EVs对AZD5363预处理后的ID8细胞AKT相关蛋白的表达。结果:分离的ADSCs出现了十分典型的干细胞形态特点,并且能够通过诱导向成骨和成脂方向分化,这些均满足间质干细胞的一般特征;ADSC-EVs表达CD9和CD81蛋白;与PBS组相比,ADSC-EVs组具有显著促进ID8细胞增殖和迁移的能力,且40μg/m L ADSC-EVs组较20μg/m L ADSC-EVs组促增殖和迁移能力更强（P＜0.05）;随着ADSC-EVs浓度的增加,其能够显著促使ID8细胞E-钙黏蛋白表达降低,N-钙黏蛋白和波形蛋白表达升高,另外,p-AKT也随之表达增加（P＜0.05）。裸鼠荷瘤实验显示ADSC-EVs组的小鼠生存期显著低于PBS组（P＜0.05）,体内肿瘤的生长速度、重量和体积均显著高于PBS组（P＜0.05）;肿瘤组化显示ADSC-EVs组具有更强的恶性程度以及更高表达PCNA。另外,AZD5363抑制剂预处理ID8细胞60 min后,再加入40μg/m L ADSC-EVs处理该细胞,结果显示AZD5363抑制剂能够有效的抑制ADSC-EVs对ID8细胞的增殖和迁移能力,并提示与AKT信号通路的磷酸化有关。结论:ADSC-EVs可能通过激活AKT信号的磷酸化促进ID8细胞EMT,进而增强其增殖和迁移能力。
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