【摘 要】
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目的:探究小型猪PRP对PDLSC成骨的作用及组织块法多次获得PDLC的生物学特性及功能是否一致。 方法:全麻下采集贵州小型猪静脉全血,三次离心法制备PRP,测定其中TGF-β1和PDGF-A
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目的:探究小型猪PRP对PDLSC成骨的作用及组织块法多次获得PDLC的生物学特性及功能是否一致。 方法:全麻下采集贵州小型猪静脉全血,三次离心法制备PRP,测定其中TGF-β1和PDGF-AB的含量。小型猪PDLSC的获得采用组织块法,有限稀释法进行STRO-1阳性细胞分离纯化,并进行扩大培养,同时绘制细胞的增殖曲线。将小型猪PDLSC分别培养在含有0.8%、1%、1.2%(V/V)PRP的生长液中,以未添加PRP组为对照,分别在第3、7、14、21天测定AKP活性检测各组细胞的成骨性。收集原代培养传代后的牙周膜组织块继续进行组织块法培养,如此反复获得原代 PDLC。每次获得的原代细胞进行扩增培养,分别选取第1、3、5次获得的PDLC分为A、B、C三组,设第一次获得的PDLC为对照组A组,绘制细胞增殖曲线,进行成骨诱导,流式细胞技术检测各组细胞周期和STRO-1表面标记物的表达,提取三个组PDLC全组DNA,实时荧光定量PCR测定PDLC相对端粒长度,Trizol提取PDLC全组RNA,实时荧光定量PCR测定PDLC端粒酶表达水平。 结果:有限稀释法单克隆纯化后细胞的增殖曲线从第3天起进入对数生长期,第8天时数量达到顶峰。PRP诱导成骨第21天茜素红染色呈阳性;三种PRP浓度培养至14天时,AKP活性达到峰值,其中1.0%组AKP活性较其他各组高(P<0.05),培养至第21天AKP活性降低。组织块法多次获得的三组PDLC增殖趋势和扩增数量比较相近,A、B两组 PDLC细胞周期检测结果为 G0/G1期90.33%±0.80%和90.50%±1.71%,G2期为9.67%±0.33%和9.5%±1.70%,无统计学差别(P>0.05),C组细胞周期检测结果为G0/G1期83.25%±1.44%,G2/S期为14.3%±1.97%,G0/G1期低于 A组,结果差异具有统计学意义(P<0.05),三组结果表明大部分细胞处于静止期。A、B、C三组PDLC STRO-1表面标记物阳性率分别为5.9%,6.0%和5.0%。在成骨诱导方面,三组PDLC在第21天时具有茜素红染色阳性的矿化结节。A、B、C三组PDLC端粒长度差异无统计学意义(P>0.05),端粒酶表达水平C组高于A组(P<0.05),B组与A组表达水平无差异(P>0.05)。 结论:PRP可以诱导PDLSC成骨分化,且1.0%浓度时的诱导成骨能力最强。前三次反复利用组织块获得的小型猪PDLC生物学特性及功能相似,能否用于实验研究和临床治疗有待进一步的探讨。
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