【摘 要】
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背景:肝损伤是临床上一种常见的肝脏疾病。四氯化碳（CCl4）作为一种常见化学物质可诱导肝损伤的发生,急性肝损伤可引发肝衰竭,而持续性的轻度肝损伤会导致肝纤维化及肝硬化,严重威胁人类的健康。肝螺杆菌（Helicobacter hepaticus,H.h）是一种主要定植于宿主肠道内革兰氏阴性菌,属于弯曲菌目螺杆菌科螺杆菌属。研究表明,高脂饲养等环境应激可促进宿主体内的H.h从肠道向肝脏转移。但关于H.
【基金项目】
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江苏省重点研发计划（社会发展）项目（BE2020674）； 扬州大学高端人才计划； 扬州大学中青年学术带头人基金；
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背景:肝损伤是临床上一种常见的肝脏疾病。四氯化碳（CCl4）作为一种常见化学物质可诱导肝损伤的发生,急性肝损伤可引发肝衰竭,而持续性的轻度肝损伤会导致肝纤维化及肝硬化,严重威胁人类的健康。肝螺杆菌（Helicobacter hepaticus,H.h）是一种主要定植于宿主肠道内革兰氏阴性菌,属于弯曲菌目螺杆菌科螺杆菌属。研究表明,高脂饲养等环境应激可促进宿主体内的H.h从肠道向肝脏转移。但关于H.h感染在慢性肝纤维化和急性肝损伤中的作用尚不明确。本研究拟采用BALB/c小鼠为动物模型,通过联合H.h感染和CC14处理,探讨H.h感染对CCl4致急慢性肝损伤病程的影响。目的与方法:（1）为探讨H.h感染对CCl4致BALB/c小鼠慢性肝损伤的影响,本研究将雄性BALB/c小鼠（5-6周龄,40只）随机分为4组（对照组、H.h组、CCl4组、H.h+CCl4组）,实验周期为12周:对照组进行正常饲喂;H.h组采用H.h溶液灌胃处理,每3天一次;CC14组使用40%CCl4溶液进行腹腔注射处理,每3天一次;H.h+CCl4组于H.h灌胃结束1周后,进行CCl4处理。分别于CCl4注射后的4周、12周进行采样。检测小鼠体内H.h肝脏定植量、血清中谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）含量;分别采用苏木精-伊红染色法（HE）和天狼星红染色法观察小鼠肝脏纤维化病变;采用免疫组化法和荧光定量（RT-qPCR）检测小鼠肝脏中IL-6、IL-33、α-SMA、TNF-a和TBF-β的表达。（2）为探讨H.h感染对CCl4致BALB/c小鼠急性肝损伤的影响,本研究将雄性BALB/c小鼠（5-6周龄,40只）随机分为4组（对照组、H.h组、CCl4组、H.h+CCl4组）:对照组进行正常饲喂;H.h组采用H.h灌胃处理,每3天一次,H.h感染持续8周;CCl4组在第8周时,使用40%CCl4溶液进行一次腹腔注射处理;H.h+CCl4组于H.h感染8周后,用40%CCl4溶液进行一次腹腔注射。分别于CCl4注射后的2 d、5 d、9 d和12 d进行采样,检测指标与慢性实验相同。结果:（1）慢性实验结果显示,处理4周时,CC14组和H.h+CCl4组小鼠均出现轻度肝纤维化,其他组未见明显病变。处理12周时,与H.h组相比,H.h+CCl4组小鼠肝脏中H.h定植量显著升高,与CC14组相比,H.h+CCl4组小鼠血清中ALT和AST均显著升高,肝脏中胶原纤维沉积量增多,炎症和纤维化相关因子转录水平显著升高。（2）急性实验结果显示,在处理2 d、5 d和12 d时,CCl4组与H.h+CCl4组各类数据无明显差异。9d时,与CCl4相比,H.h+CCl4组小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）含量升高,苏木精-伊红染色法（HE）、天狼星红染色观察到急性肝损伤加剧;免疫组化和蛋白质印迹法（Western blot）检测IL-33抗体和α-SMA蛋白表达量升高,荧光定量（RT-qPCR）检测IL-6、TNF-α、TGF-β、iNOS、IL-4等细胞因子转录水平升高。结论:综上表明,CCl4处理能够促进H.h在小鼠肝脏中定植,同时H.h感染能够加剧CCl4诱导的BALB/c小鼠肝纤维化病变,抑制CCl4致急性肝损伤的修复。本研究可以为进一步揭示肝损伤疾病的发病机制提供理论依据。
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