【摘 要】
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草乌Aconitum kusnezoffii Reichb.为毛莨科一年生草本植物北乌头的干燥块根,蒙药名为“泵阿”,具有杀“黏”,止痛,燥“斜日乌素”等功效。生草乌由于毒性剧烈,临床应用须经炮制。蒙药诃子制草乌是我国传统民族医药炮制草乌的典范,因其具有减毒效果显著、有效保留了草乌中的成分,被广泛应用于蒙医、藏医临床用药。为保证临床用药的安全有效性,规范蒙药诃子制草乌的炮制工艺,完善《中国药典》对
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草乌Aconitum kusnezoffii Reichb.为毛莨科一年生草本植物北乌头的干燥块根,蒙药名为“泵阿”,具有杀“黏”,止痛,燥“斜日乌素”等功效。生草乌由于毒性剧烈,临床应用须经炮制。蒙药诃子制草乌是我国传统民族医药炮制草乌的典范,因其具有减毒效果显著、有效保留了草乌中的成分,被广泛应用于蒙医、藏医临床用药。为保证临床用药的安全有效性,规范蒙药诃子制草乌的炮制工艺,完善《中国药典》对蒙药诃子制草乌的质量标准,本文以蒙药草乌为研究对象,比较不同产地草乌在生物碱种类及含量上的差异,优化蒙药诃子制草乌的炮制规范,建立蒙药诃子制草乌的质量标准。为蒙药诃子制草乌临床应用的安全科学奠定基础。本课题的主要研究内容有以下几个方面。1.草乌乌头类生物碱含量测定方法的研究采用HPLC技术建立一种可以同时测定草乌中的双酯型和单酯型生物碱的高效液相色谱方法,通过系统适用性试验及方法学的验证,考察不同条件下色谱图的分离度、不对称性等指标,结果在235nm波长下,使用Sunniest-C18(5μm,4.6mm*250mm)色谱柱,以乙腈-50mmo L/L乙酸铵溶液为流动相,1.0m L/min流速,30℃柱温时得到的色谱图峰型最好;经过方法学验证,该方法专属性强,线性好,稳定性、重复性、重现性、加样回收率均符合2020版《中国药典》的规定。因此表明该方法稳定可靠,能够适用于草乌中乌头类生物碱的含量测定。2.草乌指纹图谱的研究应用高效液相色谱技术,按照指纹图谱方法学建立的要求,对草乌指纹图谱中10个共有峰相对保留时间和相对峰面积的精密度、稳定性、重现性进行考察,结果表明10个共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%,符合指纹图谱的建立要求。以22批不同产地批次的生草乌为研究对象,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析,得到11批次草乌的色谱图较为相近。通过分析,11批草乌共标定了10个共有峰,相似度结果表明不同批次草乌在生物碱的成分上大致一致,但含量差异较大。通过SPSS聚类分析可将11批草乌分为四类,SPSS降维分析得到得到两个主成分,总方差的贡献达到了68.236%,筛选出对应的5、6、9、10号共有峰可作为蒙药草乌药材的特征化合物。3.诃子制草乌炮制规范的研究以炮制温度、炮制时间、诃子打碎粒径及汤的用量为炮制因素,建立正交优化实验,采用Orbitrap-MS检测器,通过半定量的方式分别分析不同炮制方法得到的炮制品中乌头类生物碱和鞣质性成分的含量,通过SPSS正交试验方差分析与极差分析。得到不同炮制因素对草乌中生物碱类成分及诃子类成分的影响,参考有关蒙药炮制医籍,得到最优炮制工艺为炮制时间为4天,炮制温度为4°C,选用将诃子打碎粒径为能通过三号筛的碎片进行煮诃子汤,每天按照草乌:诃子汤=1:3(草乌:诃子=10:1煮汤)的比例进行浸泡为最优炮制方法。采用MTT检测法研究生、制草乌样品对RAW264.7细胞存活率的影响,并通过给药研究对LPS诱导的RAW264.7细胞产生的炎症反应,以ELISA试验检测NO、IL-6等炎症因子的释放水平。结果表明,草乌经诃子汤炮制后,毒性会降低,相对于模型组,诃子制草乌显著降低RAW264.7细胞的NO及IL-6两种炎症因子,初步验证了草乌在经过诃子汤炮制后起到了减毒增效的效果。4.草乌及其炮制品质量标准的研究参照《中国药典》2020版一部草乌、及制草乌项下的方法,分别考察22批产地批次生草乌、9种炮制方法得到的诃子制草乌的性状、鉴定项(薄层鉴定)、检查项(水分、总灰分、杂质)、及六种乌头类生物碱的含量,经验证,22批生草乌中仅10批符合《中国药典》的规定,9批炮制品中仅5批符合《蒙药炮制规范》规定。并在上述研究的基础上,建立蒙药诃子制草乌质量标准(草案)。
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