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目的 人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌主要危险因素，但HPV感染并不能单独致瘤。目前认为多个抑癌基因(TSG)的失活或缺失是癌变的最主要机制，杂合性丢失(LOH)是抑癌基因失活的中间步骤，微卫星不稳定性(MI)的异常揭示基因组不稳定性。为探讨LOH，MI及HPV在宫颈癌发生发展中的作用，本研究检测了宫颈癌在D10S541，D10S583，D10S1687，D3S1234，D3S1300，D3S1481六个微卫星位点的LOH及MI发生率，并分析了LOH，MI与HPV感染及临床病理参数之间的关系。 方法 宫颈浸润癌患者52例，Ⅰ期12例、Ⅱ期21例、Ⅲ期14例、Ⅳ期5例。52例中鳞癌40例、腺癌9例、鳞腺癌3例，其中高分化癌23例，中分化癌16例，低分化癌13例。同时选择宫颈上皮内瘤样病变(CIN)患者43例(CINⅠ6例、CINⅡ12例、CINⅢ15例)及正常宫颈12例为对照组。 采用常规酚-氯仿-异戊醇抽提法提取组织中的DNA，六个位点及HPV E6引物序列根据Genebank数据库查询。PCR反应条件参照文献。 PCR产物8％聚丙烯酰胺凝胶电泳，凝胶采用银染法显色。PCR产物电泳条带与自身静脉血相比，若出现电泳条带的消失或密度减少50％以上记为LOH阳性；若出现条带的增多、移动记为MI阳性；若出现HPV的PCR产物则提示HPV感染阳性。 结 果 52例宫颈浸润癌组织中至少有一个位点LOH阳性的比例为 对．2啪，明显高于CIN组广3．0阮）及正常宫颈组N阮＊P＜o． of人 LOH阳性率最高的位点在D3S1234，为sl．9％，3P三个位点 O．0％）明显高于＊ 三个位点（28．二％＊P＜0．05人 皿＊期 LOH阳性率明显高于 1、11湖口＜0．05人在 3p鳞癌高于腺癌及 鳞腺癌，在10q腺癌高于鳞癌，LOH阳性率与组织学分级无关K ＞0．05人在3p上 CIN亚的 LOH阳性率约为 CIN互的二倍，但无 统计学差异O＞o．仍L与正常宫颈相比明显增多o＜o．0人 52例宫颈浸润癌组织中，HPV感染阳性者46例，占88．5％， 明显高于＊m组（H．9阮）及正常宫颈组③．3％八P＜o．晒太各 期（互一w）HPV感染率无统计学差异K＞o．6人＊m组HPV 感染率明显高于正常宫颈组（P＜o．0U，皿期明显高于二、工期沙 ＜o．0人地5上的LO H阳性率在HPV感染阳性组明显高于阴 性（P＜o．05）。总 浸润癌中10例存在MI，占19．2％人IN及正常宫颈组织中无 MI存在。所有MI阳性者均为LOH阳性。MI阳性10例中IIPV 感染阳性者5例，阴性者5例，无统计学差异O＞o．N人 结 论 本研究检测 52例宫颈浸润癌在 D10S541，D105583， D10S1687，D3S1234，D3S1300，D3S1481六个位点的 LOH，至少有 一个位点 LOH阳性率的比例为71．2％，Mbi这JLd点可能成为 宫颈癌的好标志。 最高的LOH阳性率在D3 S1234，为sl．9％，3p的三个位点的 ·2·LOH阳性率平均为sl．0％，说明在3号染色体短臂存在高频LOH，此区域可能存在宫颈癌的相关抑癌基因，FHIT基因可能与宫颈癌发生发展密切相关。 从浸润癌互期到IV期 LOH阳性率呈逐渐递增趋势，表明3PLOH可能是宫颈癌恶性进展中的主要事件，在肿瘤的演变过程中起重要作用，是肿瘤发展的标记物。LOH并不是宫颈癌的首发原因，但却可能是导致肿瘤发展的主要因素之一。 3p三个位点的 LOH阳性率在鳞癌高于腺癌及鳞腺癌，但在10q腺癌却高于鳞癌，这可能是由于不同病理类型的宫颈癌在癌变过程中，不同的hG在起作用。六个位点的LOH率在高、中、低分化宫颈癌中无差异，说明LOH可能与宫颈癌恶性度无关。 52例宫颈浸润癌中 88．5％IHV感染阳性，明显高于QN组（u．9助）及正常宫颈组材．3防火P＜o．m人随QN级别的增加，LOH阳性率及HPy感染率亦显著增加，D3S上的LOH阳性率在IIPV感染阳性组明显高于阴性组瞩＜0．05L证明 Ipy感染与 3p的 LOH二者共同作用在宫颈癌的发展过程中更有意义。 在国内我们首次研究了位于10畔3的微卫星标记D105541等的杂合性丢失情况，结果提示有28．8％的宫颈浸润癌LOH阳性，说明10q的LOH非宫颈癌主要事件。 本研究中MI频率较低，发生率在宫颈浸润癌中为19．2％，各级CIN中及正常宫颈中均不存在，表明MI不是基因组中的常见事件。