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目的 人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌主要危险因素,但HPV感染并不能单独致瘤。目前认为多个抑癌基因(TSG)的失活或缺失是癌变的最主要机制,杂合性丢失(LOH)是抑癌基因失活的中间步骤,微卫星不稳定性(MI)的异常揭示基因组不稳定性。为探讨LOH,MI及HPV在宫颈癌发生发展中的作用,本研究检测了宫颈癌在D10S541,D10S583,D10S1687,D3S1234,D3S1300,D3S1481六个微卫星位点的LOH及MI发生率,并分析了LOH,MI与HPV感染及临床病理参数之间的关系。 方法 宫颈浸润癌患者52例,Ⅰ期12例、Ⅱ期21例、Ⅲ期14例、Ⅳ期5例。52例中鳞癌40例、腺癌9例、鳞腺癌3例,其中高分化癌23例,中分化癌16例,低分化癌13例。同时选择宫颈上皮内瘤样病变(CIN)患者43例(CINⅠ6例、CINⅡ12例、CINⅢ15例)及正常宫颈12例为对照组。 采用常规酚-氯仿-异戊醇抽提法提取组织中的DNA,六个位点及HPV E6引物序列根据Genebank数据库查询。PCR反应条件参照文献。 PCR产物8%聚丙烯酰胺凝胶电泳,凝胶采用银染法显色。PCR产物电泳条带与自身静脉血相比,若出现电泳条带的消失或密度减少50%以上记为LOH阳性;若出现条带的增多、移动记为MI阳性;若出现HPV的PCR产物则提示HPV感染阳性。 结 果 52例宫颈浸润癌组织中至少有一个位点LOH阳性的比例为 对.2啪,明显高于CIN组广3.0阮)及正常宫颈组N阮*P<o. of人 LOH阳性率最高的位点在D3S1234,为sl.9%,3P三个位点 O.0%)明显高于* 三个位点(28.二%*P<0.05人 皿*期 LOH阳性率明显高于 1、11湖口<0.05人在 3p鳞癌高于腺癌及 鳞腺癌,在10q腺癌高于鳞癌,LOH阳性率与组织学分级无关K >0.05人在3p上 CIN亚的 LOH阳性率约为 CIN互的二倍,但无 统计学差异O>o.仍L与正常宫颈相比明显增多o<o.0人 52例宫颈浸润癌组织中,HPV感染阳性者46例,占88.5%, 明显高于*m组(H.9阮)及正常宫颈组③.3%八P<o.晒太各 期(互一w)HPV感染率无统计学差异K>o.6人*m组HPV 感染率明显高于正常宫颈组(P<o.0U,皿期明显高于二、工期沙 <o.0人地5上的LO H阳性率在HPV感染阳性组明显高于阴 性(P<o.05)。总 浸润癌中10例存在MI,占19.2%人IN及正常宫颈组织中无 MI存在。所有MI阳性者均为LOH阳性。MI阳性10例中IIPV 感染阳性者5例,阴性者5例,无统计学差异O>o.N人 结 论 本研究检测 52例宫颈浸润癌在 D10S541,D105583, D10S1687,D3S1234,D3S1300,D3S1481六个位点的 LOH,至少有 一个位点 LOH阳性率的比例为71.2%,Mbi这JLd点可能成为 宫颈癌的好标志。 最高的LOH阳性率在D3 S1234,为sl.9%,3p的三个位点的 ·2·LOH阳性率平均为sl.0%,说明在3号染色体短臂存在高频LOH,此区域可能存在宫颈癌的相关抑癌基因,FHIT基因可能与宫颈癌发生发展密切相关。 从浸润癌互期到IV期 LOH阳性率呈逐渐递增趋势,表明3PLOH可能是宫颈癌恶性进展中的主要事件,在肿瘤的演变过程中起重要作用,是肿瘤发展的标记物。LOH并不是宫颈癌的首发原因,但却可能是导致肿瘤发展的主要因素之一。 3p三个位点的 LOH阳性率在鳞癌高于腺癌及鳞腺癌,但在10q腺癌却高于鳞癌,这可能是由于不同病理类型的宫颈癌在癌变过程中,不同的hG在起作用。六个位点的LOH率在高、中、低分化宫颈癌中无差异,说明LOH可能与宫颈癌恶性度无关。 52例宫颈浸润癌中 88.5%IHV感染阳性,明显高于QN组(u.9助)及正常宫颈组材.3防火P<o.m人随QN级别的增加,LOH阳性率及HPy感染率亦显著增加,D3S上的LOH阳性率在IIPV感染阳性组明显高于阴性组瞩<0.05L证明 Ipy感染与 3p的 LOH二者共同作用在宫颈癌的发展过程中更有意义。 在国内我们首次研究了位于10畔3的微卫星标记D105541等的杂合性丢失情况,结果提示有28.8%的宫颈浸润癌LOH阳性,说明10q的LOH非宫颈癌主要事件。 本研究中MI频率较低,发生率在宫颈浸润癌中为19.2%,各级CIN中及正常宫颈中均不存在,表明MI不是基因组中的常见事件。