论文部分内容阅读
本研究采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤（MCAO）模型，通过Longa5分制神经功能缺损评分法（NDS）、红四氮唑(TTC)染色及脑梗死面积的测定、原位细胞凋亡检测法（TUNEL法）判断七氟烷后处理是否具有保护脑缺血再灌注损伤作用，并通过Western Blot技术检测缺血再灌注脑组织中PTEN、Akt的表达及磷酸化的改变来阐述七氟烷后处理脑保护作用的可能机制。一、七氟烷后处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤采用MCAO模型，在再灌注即刻给予不同浓度（分别为0.5MAC、1.0MAC和1.5MAC）七氟烷后处理30min，通过Longa5分制NDS法、TTC染色及脑梗死体积的测定和TUNEL凋亡检测判断七氟烷后处理是否具有保护脑缺血再灌注损伤作用。结果显示1.0MAC与1.5MAC七氟烷后处理能够明显保护再灌注脑组织，而0.5MAC后处理脑保护作用不明显。二、大鼠脑缺血再灌注损伤诱导的PTEN、Akt的表达及磷酸化的改变采用MCAO模型，通过Western Blot技术检测大鼠脑缺血90min，再灌注后0min、30min、3h、6h、12h、24h及72h脑缺血半影区中PTEN、Akt的表达及磷酸化的改变。结果显示p-Akt表达水平在脑缺血再灌注后30min开始升高，再灌注3h达到最高峰，持续至再灌注12h，随后逐渐下降，至再灌注24h恢复至假手术组水平，持续至72h；p-PTEN表达水平在脑缺血再灌注即刻开始升高，再灌注12h达到最高峰，随后逐渐下降，至再灌注24h恢复至假手术组水平，持续至72h。缺血再灌注诱导的p-Akt及p-PTEN表达变化，表明Akt、PTEN参与了大鼠脑缺血再灌注损伤。三、PTEN在七氟烷后处理激活大鼠脑缺血再灌注时PI3K/Akt信号通路中的作用采用MCAO模型，缺血前腹腔注射pic（PTEN抑制剂），再灌注即刻给予七氟烷后处理，采用NDS评分、TTC染色梗死体积计算及TUNEL阳性细胞百分比评估脑损伤程度，Western Blot法检测p-PTEN、p-Akt表达程度。七氟烷后处理及腹腔注射pic均能减少NDS、脑梗死体积及TUNEL阳性细胞百分比，而p-Akt、p-PTEN表达程度则增强；腹腔注射pic的同时也给予七氟烷后处理并没有增强七氟烷后处理的脑保护作用，p-Akt、p-PTEN表达水平亦无进一步增强，表明七氟烷后处理可通过抑制PTEN而增强PI3K/Akt信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。