自2008年Akirin在果蝇（Drosophila melanogaster）和小鼠（Mus musculus）中被首次发现以来,短短十多年的时间里,核因子Akirin已被证实与脊椎动物和无脊椎动物的肌肉发育、胚胎发育、肿瘤形成和先天免疫等密切相关。团头鲂（Megalobrama amblycephala）是中国重要的经济鱼类之一。但是,近年来,由于鱼类药物的滥用以及工厂化高密度养殖方式的推广等,致使团头鲂极易受外界病原菌的感染。由嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）所导致的败血症是池塘养殖中最常见的疾病之一。本研究对团头鲂Akirin1和Akirin2基因进行了克隆、表达及免疫保护作用检测,并在L8824细胞系中分别过表达和敲降Akirin1和Akirin2基因后检测其对NF-κB p50（Nuclear FactorκB subunit p50）和NF-κB p65（Nuclear FactorκB subunit p65）及LEAP-1（liver-expressed antimicrobial peptide 1）和LEAP-2（liver-expressed antimicrobial peptide 2）的调控作用。通过GST pull-down技术进一步验证在体外Akirin1和Akirin2与NF-κB p50和NF-κB p65蛋白之间的相互作用,通过点突变探究转录因子NF-κB p65对LEAP-1和LEAP-2基因转录的影响。通过探索团头鲂Akirin1和Akirin2基因在抵御嗜水气单胞菌感染过程中发挥的作用,有利于解决鱼类病害多发的问题并对于研制高效鱼类疫苗具有重要意义。本研究结果主要如下:1.通过PCR的方法,根据团头鲂转录组克隆得到Akirin1和Akirin2的c DNA序列。序列分析表明,Akirin1的ORF全长为570 bp,其蛋白质由189个氨基酸组成,N端23-27位有一个核定位信号（KRRRC）。Akirin2的ORF全长为558 bp,其蛋白质由185个氨基酸组成,含有两个核定位信号,分别是26-30位（KRRRC）和75-78位（KRRH）。不同物种的Akirin氨基酸序列保守性较高,且团头鲂与草鱼（Ctenopharyngodon idella）的Akirin在进化上亲缘关系最近,其次是斑马鱼（Danio rerio）。2.通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）发现,Akirin1和Akirin2在健康团头鲂10个组织中均有表达。其中,Akirin1、Akirin2在头肾、肝脏、脾脏免疫相关组织中有较高水平的表达,而血液中的表达水平相对较低。使用嗜水气单胞菌感染团头鲂后,免疫组织肝脏与脾脏中的Akirin1、Akirin2、NF-κB p50、NF-κB p65以及抗菌肽LEAP-1、LEAP-2的表达量均能够被诱导而显著上调。LPS及A.hydrophila刺激团头鲂原代肝脏与脾脏细胞后,Akirin1、Akirin2、NF-κB p50、NF-κB p65以及LEAP-1、LEAP-2的表达量显著上调,推测它们均参与团头鲂抵御革兰氏阴性菌感染的免疫反应。为进一步验证Akirin1和Akirin2与NF-κB p50和NF-κB p65以及LEAP-1、LEAP-2的调控关系,本研究在L8824细胞系中分别过表达和敲降Akirin1和Akirin2,结果表明Akirin1对NF-κB p50、NF-κB p65及LEAP-1、LEAP-2的表达无明显影响,Akirin2对NF-κB p50、NF-κB p65及LEAP-1、LEAP-2的表达具有正调控作用。3.原核表达带有His标签的团头鲂Akirin1和Akirin2重组蛋白,纯化后对团头鲂进行腹腔注射。结果表明,Akirin1和Akirin2均能在一定程度上提高嗜水气单胞菌感染的团头鲂存活率。本研究同样表达了带有GST标签的NF-κB p65以及NF-κB p50的IPT和RHD结构域。GST pull-down实验结果显示,团头鲂Akirin1与NF-κB p50和NF-κB p65均不结合,Akirin2与NF-κB p50的IPT结构域在体外可以结合。4.对LEAP-1和LEAP-2启动子区域进行克隆,最终得到LEAP-1和LEAP-2序列长度分别为884 bp和1907 bp。通过预测发现LEAP-1和LEAP-2启动子区可能存在NF-κB p65转录因子结合位点。进一步的定点突变分析验证了NF-κB p65结合位点对LEAP-1和LEAP-2基因转录的影响,结果显示转染突变型质粒细胞中双荧光素酶活性降低。