论文部分内容阅读
【目的】
1.从神经元病理学改变和蛋白表达水平探讨红花黄色素(safflower yellow， SY)减轻控制性低血压(controlled hypotension，CH)诱导的兔脑海马CA1区神经元缺氧缺血性损伤的作用机制。
【方法】
70只新西兰大白兔随机分为7组：对照(Control)组、溶剂乙醇(ethyl alcohol， EtOH)组、抑制剂利非西呱(lificiguat，YC-1)组、激动剂二甲基草酰甘氨酸(dimethyloxaloylglycine，DMOG)组、模型CH组、CH+SY组、CH+YC-1组，每组10只(雌雄各半)。构建控制性低血压动物模型：各组均用乳酸钠林格注射液(Sodium Lactate Ringer’s Injection，L-R)补充实验兔禁食禁饮丧失的液体。CH组静脉泵注5%葡萄糖注射液(5%GS)配置的硝普钠，使平均动脉压(mean arterial pressure，MAP)降低至基础值的45%~50%，在降压开始30min后静脉给予生理盐水(normal saline，NS)稀释的EtOH溶液，维持目标血压1h后停用硝普钠，改为泵注L-R使动物血压回升并维持2h，然后处死实验动物。CH+SY组、CH+YC-1组在降压开始30min后静脉给予相应药物，其余步骤同CH组。Control组、EtOH组、YC-1组、DMOG组不作降压和药物处理，在泵注5%GS30min后分别静脉给予NS或NS稀释的EtOH溶液，在泵注5%GS1h后改用L-R继续泵注2h，随后处死实验动物。借助苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)和TUNEL染色研究观察海马CA1区神经元的损伤程度，通过缺氧诱导因子-1α(hypoxia-induciblefactor-1alpha，HIF-1α)免疫组化染色探察其在海马CA1区的分布特征，以及采用蛋白免疫印迹(western blot，WB)检测半胱氨酸天冬氨酸特异酶-3(cysteine aspastic acid-specific protease，Caspase-3)和HIF-1α蛋白表达水平。
【结果】
1.各组HE染色结果：DMOG组和CH组神经元损伤，出现核固缩、核边聚、核分裂、细胞排列紊乱。CH+SY组与CH+YC-1组有不同程度的神经元丢失、凋亡、核固缩。Control组、EtOH组、YC-1组细胞呈椭圆形、排列规则，基本未见到神经元的丢失及核固缩情况。
2.各组HIF-1α免疫组化表达水平：HIF-1α染色阳性表达呈棕(褐)黄色细沙样颗粒，不均匀分布于细胞质内。Control组、EtOH组、YC-1组之间HIF-1α表达比较差异无统计学意义(P＞0.05)。DMOG组、CH组、CH+SY组和CH+YC-1组HIF-1α表达均较Control组、EtOH组、YC-1组增多(P＜0.05)。CH+SY组HIF-1α的表达较DMOG组、CH组减少(P＜0.05)，而CH+SY组与CH+YC-1组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，但低于DMOG组和CH组(P＜0.05)。DMOG组HIF-1α表达较CH组减少(P＜0.05)。
3.各组TUNEL染色结果：在荧光显微镜下，凋亡细胞可见绿色荧光分布。Control组、EtOH组、YC-1组之间细胞凋亡指数(apoptotic index，AI)比较差异无统计学意义(P＞0.05)。CH+SY组AI较Control组、EtOH组、YC-1组升高(P＜0.05)，但较DMOG组、CH组降低(P＜0.05)。CH+YC-1组AI与CH+SY组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，但高于Control组、EtOH、YC-1组(P＜0.05)，而低于DMOG组、CH组(P＜0.05)。DMOG组AI较CH组降低(P＜0.05)，以上两组AI均较Control组、EtOH组、YC-1组升高(P＜0.05)。
4.各组WB中HIF-1α和Caspase-3表达水平：HIF-1α与Caspase-3在Control组、EtOH组、YC-1组之间的表达量差异均无统计学意义(allP＞0.05)，但上述三组表达量均少于DMOG、CH组、CH+SY组和CH+YC-1组(allP＜0.05)。CH+SY组HIF-1α与Caspase-3表达量均比DMOG组、CH组有所减少(allP＜0.05)，而与CH+YC-1组之间的差异均无统计学意义(allP＞0.05)。CH+YC-1组HIF-1α与Caspase-3表达量均较DMOG组、CH组减少(allP＜0.05)。HIF-1α与Caspase-3在DMOG组中的表达量均较CH组减少(allP＜0.05)。
【结论】
1.DMOG增加HIF-1α表达使兔脑海马CA1区神经元损伤；YC-1减少HIF-1α表达从而减轻兔脑海马CA1区神经元损伤。
2.SY通过抑制HIF-1α表达以减少细胞凋亡，从而减轻CH诱导的兔脑海马CA1区神经元缺氧缺血性损伤。
1.从神经元病理学改变和蛋白表达水平探讨红花黄色素(safflower yellow， SY)减轻控制性低血压(controlled hypotension，CH)诱导的兔脑海马CA1区神经元缺氧缺血性损伤的作用机制。
【方法】
70只新西兰大白兔随机分为7组：对照(Control)组、溶剂乙醇(ethyl alcohol， EtOH)组、抑制剂利非西呱(lificiguat，YC-1)组、激动剂二甲基草酰甘氨酸(dimethyloxaloylglycine，DMOG)组、模型CH组、CH+SY组、CH+YC-1组，每组10只(雌雄各半)。构建控制性低血压动物模型：各组均用乳酸钠林格注射液(Sodium Lactate Ringer’s Injection，L-R)补充实验兔禁食禁饮丧失的液体。CH组静脉泵注5%葡萄糖注射液(5%GS)配置的硝普钠，使平均动脉压(mean arterial pressure，MAP)降低至基础值的45%~50%，在降压开始30min后静脉给予生理盐水(normal saline，NS)稀释的EtOH溶液，维持目标血压1h后停用硝普钠，改为泵注L-R使动物血压回升并维持2h，然后处死实验动物。CH+SY组、CH+YC-1组在降压开始30min后静脉给予相应药物，其余步骤同CH组。Control组、EtOH组、YC-1组、DMOG组不作降压和药物处理，在泵注5%GS30min后分别静脉给予NS或NS稀释的EtOH溶液，在泵注5%GS1h后改用L-R继续泵注2h，随后处死实验动物。借助苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)和TUNEL染色研究观察海马CA1区神经元的损伤程度，通过缺氧诱导因子-1α(hypoxia-induciblefactor-1alpha，HIF-1α)免疫组化染色探察其在海马CA1区的分布特征，以及采用蛋白免疫印迹(western blot，WB)检测半胱氨酸天冬氨酸特异酶-3(cysteine aspastic acid-specific protease，Caspase-3)和HIF-1α蛋白表达水平。
【结果】
1.各组HE染色结果：DMOG组和CH组神经元损伤，出现核固缩、核边聚、核分裂、细胞排列紊乱。CH+SY组与CH+YC-1组有不同程度的神经元丢失、凋亡、核固缩。Control组、EtOH组、YC-1组细胞呈椭圆形、排列规则，基本未见到神经元的丢失及核固缩情况。
2.各组HIF-1α免疫组化表达水平：HIF-1α染色阳性表达呈棕(褐)黄色细沙样颗粒，不均匀分布于细胞质内。Control组、EtOH组、YC-1组之间HIF-1α表达比较差异无统计学意义(P＞0.05)。DMOG组、CH组、CH+SY组和CH+YC-1组HIF-1α表达均较Control组、EtOH组、YC-1组增多(P＜0.05)。CH+SY组HIF-1α的表达较DMOG组、CH组减少(P＜0.05)，而CH+SY组与CH+YC-1组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，但低于DMOG组和CH组(P＜0.05)。DMOG组HIF-1α表达较CH组减少(P＜0.05)。
3.各组TUNEL染色结果：在荧光显微镜下，凋亡细胞可见绿色荧光分布。Control组、EtOH组、YC-1组之间细胞凋亡指数(apoptotic index，AI)比较差异无统计学意义(P＞0.05)。CH+SY组AI较Control组、EtOH组、YC-1组升高(P＜0.05)，但较DMOG组、CH组降低(P＜0.05)。CH+YC-1组AI与CH+SY组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，但高于Control组、EtOH、YC-1组(P＜0.05)，而低于DMOG组、CH组(P＜0.05)。DMOG组AI较CH组降低(P＜0.05)，以上两组AI均较Control组、EtOH组、YC-1组升高(P＜0.05)。
4.各组WB中HIF-1α和Caspase-3表达水平：HIF-1α与Caspase-3在Control组、EtOH组、YC-1组之间的表达量差异均无统计学意义(allP＞0.05)，但上述三组表达量均少于DMOG、CH组、CH+SY组和CH+YC-1组(allP＜0.05)。CH+SY组HIF-1α与Caspase-3表达量均比DMOG组、CH组有所减少(allP＜0.05)，而与CH+YC-1组之间的差异均无统计学意义(allP＞0.05)。CH+YC-1组HIF-1α与Caspase-3表达量均较DMOG组、CH组减少(allP＜0.05)。HIF-1α与Caspase-3在DMOG组中的表达量均较CH组减少(allP＜0.05)。
【结论】
1.DMOG增加HIF-1α表达使兔脑海马CA1区神经元损伤；YC-1减少HIF-1α表达从而减轻兔脑海马CA1区神经元损伤。
2.SY通过抑制HIF-1α表达以减少细胞凋亡，从而减轻CH诱导的兔脑海马CA1区神经元缺氧缺血性损伤。