目的:探索一种基于激光扫描共聚焦显微镜的双色荧光染色技术,期望能够达到类似传统HE染色的诊断效果,为该技术用于指导脑胶质瘤手术切除策略的制定,寻找术中胶质瘤与正常脑组织的切缘奠定前期基础。方法:取新鲜人脑胶质瘤标本,将同一胶质瘤标本分别分成用于双色荧光染色和HE组织染色的大小相同的两份,然后一份标本使用荧光染色剂BODIPY和DRAQ5分别染脑组织脂质和DNA,在激光扫描共聚焦显微镜下进行双色荧光成像,采集荧光图像,之后另一份标本进行HE组织染色处理,用玻片扫描仪进行扫描成像。将荧光图像随机交由两名病理科医生进行评估,与HE图像进行对比,90天后两位病理科医生再次对双色荧光图像进行评估。结果:基于激光扫描共聚焦显微镜的双色荧光染色技术具有与HE染色十分相似的组织学特点,且脂质保留完整;病理医生A第一次双色荧光染色诊断与HE染色诊断的κ值为0.48,具有一般满意的一致性,第二次的κ值为0.76,具有相当满意的一致性;病理医生B的第一次荧光染色诊断的κ值为0.64,与HE染色诊断相比具有一般一致性,第二次κ值为0.82,具有相当满意的一致性。病理医生A、B的诊断准确率分别从第一次76%、83%提高到第二次的89%、92%,具有很高的准确度。除了高准确度外,表2-3在敏感度与特异度方面也显示了一个令人鼓舞的结果。在28例低级别胶质瘤中,16例（特异度57%）和23例（特异度71%）分别被病理医生A识别出来。病理医生B则在第一次和第二次中分别识别出了20例和25例低级别胶质瘤,特异度分别为82%和89%。在43例高级别胶质瘤中,病理医生A第一次正确识别出来38例,敏感度88%,病理医生B第一次评估正确识别了39例高级别胶质瘤,敏感度90%,第二次评估两人均正确识别了40例高级别胶质瘤,敏感度升高到93%。随后对双色荧光染色图像进行荧光强度的半定量分析,结果显示高级别胶质瘤的绿色荧光强度、红色荧光强度及总荧光强度均强于低级别胶质瘤（P＜0.05）。结论:1.双色荧光染色图像具有类似HE染色的组织学特点,同时与HE染色这一“金标准”相比,诊断一致性基本满意,诊断正确率、敏感性及特异性高。为我们应用双色荧光图像术中诊断脑胶质瘤,指导手术策略的制定,寻找术中胶质瘤与正常脑组织的切缘,达到更高的肿瘤全切率及次全切率,改善患者预后奠定了初步基础。2.病理科医生借助HE染色读片经验可以初步掌握双色荧光染色图像的评估,节省了巨大的学习和时间成本。3.高级别胶质瘤的双色荧光染色荧光强度强于低级别胶质瘤,脂质代谢可能影响不同级别胶质瘤的绿色荧光强度,双色荧光染色技术完整保留了脂质,使得脂质代谢这一重要过程在新鲜人脑胶质瘤细胞中的研究成为可能。