白细胞介素22(IL-22),属于IL-10家族成员,主要由T淋巴细胞和固有淋巴细胞分泌,在体内通过与其受体(IL-22R1和IL-10R2)结合形成异源二聚体受体复合物并激活信号通路来发挥生物学功能。研究发现,人和鼠的IL-22在体内发挥抗炎和促炎的双重作用:一方面,它主要作用于黏膜上皮细胞,在黏膜损伤的修护,炎症反应及抗感染中发挥重要作用;另一方面,IL-22在组织中的长期过表达可导致宿主慢性炎症的发生。小肠作为宿主免疫的重要场所,是IL-22发挥生物效应的关键部位。近年来对IL-22的研究主要集中在人源和鼠源,鱼IL-22也曾有报道,但猪IL-22的研究尚未见报道。鉴于此,本研究旨在通过以下二方面的研究阐释猪IL-22能否发挥保护宿主抵御病原入侵、抵抗感染的作用,为猪IL-22的研究奠定基础。(1)猪白细胞介素22的原核表达和活性研究从猪外周血单核细胞衍生的DC细胞中克隆出大小为568 bp的猪IL-22基因序列和去信号肽的IL-22成熟序列。首先将该去信号肽基因片段克隆到原核表达载体PET-30a(Amp+)中,构建重组质粒PET-30a/IL-22,再将阳性重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达了大小为22 KD的重组蛋白His/IL-22,并利用Ni-NTA亲和层析法进行纯化。生物学活性检测结果显示:纯化的His/IL-22对猪IPEC-J2中IL-18、IFN-λ和BD-2均有上调表达的作用,当用终浓度为0.04μg/m L的重组蛋白处理IPEC-J2细胞时,随着His/IL-22对IPEC-J2细胞处理时间的延长,细胞中这三种细胞因子表达呈现逐渐增加的趋势,在48 h时,三种细胞因子的表达量均达到最大。此外,病毒增殖抑制试验发现His/IL-22具有抑制PEDV-CV777和Po RV在IPEC-J2中复制的作用。这一结果首次证明猪IL-22能够上调IPEC-J2中细胞因子的表达,并且帮助IPEC-J2抵抗病毒感染。(2)猪IL-22单克隆抗体的制备以前期试验获得的具有生物活性的His/IL-22蛋白作为抗原,腹腔免疫6-8周龄雌性BALB/C小鼠,取其脾细胞,通过细胞融合的方法通筛选出了4株能分泌抗猪IL-22抗体的阳性杂交瘤细胞,分别命名为2G10、2C7、6B11、7F3,这四株细胞分泌的抗体亚型均为Ig M K型。根据预实验中细胞培养上清抗体效价测定的结果选取了效价较高的6B11和7F3细胞株制备腹水,ELISA测定6B11细胞株培养上清及其腹水效价,分别为1∶50和1∶25 600,7F3细胞株的培养上清及其腹水效价分别为1∶100和1∶6 400。本次试验制备的猪IL-22单克隆抗体为建立准确快速检测猪IL-22的ELISA方法奠定了基础。