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目的:通过Realtime-PCR技术检测miRNA205在大肠癌组织、对应的正常黏膜中的表达水平,分析其表达水平与大肠癌患者各临床病理参数之间的关系。同时进一步应用平板克隆实验、MTT比色分析法和Transwell实验检测miRNA205对大肠癌细胞的增殖、克隆、迁移和侵袭能力等过程的影响。探讨miRNA205作为肿瘤标记物对大肠癌的诊断价值,进一步阐明miRNA205在肿瘤的发生、发展过程中的生物功能,为大肠癌的早期诊断、治疗提供理论和实验基础。方法:1、收集2013年4月-8月安徽医科大学第一附属医院普外科37对新鲜大肠癌组织及癌远端5cm正常大肠粘膜组织。2、应用Realtime-PCR法检测大肠癌组织及正常黏膜组织中miRNA205的表达水平,分析miRNA205的表达水平与大肠癌各临床病理特征的关系。3、选取5种大肠癌细胞株(DLD-1、Caco-2、colo320、HT29、HCT116)进行培养,检测各细胞株中miRNA205的表达情况。4、在大肠癌细胞株HCT116细胞株中转染miRNA205,并设对照组,转染24小时后检测转染细胞中miRNA205的表达水平。5、通过平板克隆形成实验观察转染miRNA205前后HCT116细胞集落形成情况。转染miRNA205后1天、2天、3天、4天、5天分别用MTT比色分析法检测5个时段OD值,绘制细胞的生长曲线。通过Transwell实验观察miRNA205转染前后HCT116细胞的迁移和侵袭能力的改变。6、应用graphpad软件对数据进行统计分析,数据以平均数±标准差表示,两组间配对样本采用配对t检验,两组间独立样本采用非配对t检验,均以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1、miRNA205在37例大肠癌组织及其邻近正常黏膜中的表达水平分别为1.171E-07±1.19E-08和2.623E-07±3.42E-08,大肠癌组织中miRNA205表达水平明显低于正常黏膜中miRNA205的表达水平,差异有统计学意义(P<0.0001)。2、根据大肠癌中miRNA205的表达水平与临床各病理参数的比较发现,miRNA205的表达与患者年龄、性别和分化、浸润深度、淋巴结转移不相关,所有对比均无统计学意义(P>0.05)。)3、miRNA205在DLD-1、Caco-2、Colo320、HT29、HCT116中的表达水平不同,结果以DLD-1中miRNA205的含量为单位1,其他细胞系与之比较,Caco-2中为302.76,HT29中为41.96,Colo320中为0.084,HCT116中为1.63。4、在HCT116大肠癌细胞株中进行转染实验,实验组(转染了miR-205mimics组)和对照组(NS)在24小时候检测miRNA205的表达情况,对照组设定为1,转染组miRNA205表达量为57861.68。5、在HCT116细胞的克隆实验中,实验组和对照组间细胞集落数有明显差异,实验组(转染了miR-205mimics组)细胞集落形成数量较对照组少,集落体积明显小于对照组。6、HCT116细胞转染miRNA205后1天、2天、3天、4天、5天,通过MTT比色分析法检测OD值发现HCT116细胞中miRNA205的含量不影响细胞的增殖,第一天:(0.30125、0.313);第二天:(0.52875、0.56625);第三天:(0.83225、0.9108);第四天:(1.45667、1.283);第五天:(2.1617、2.2623)。结果无统计学意义。7、HCT116细胞转染miRNA205后,细胞的迁移能力减弱,侵袭能力无明显改变。结论:1、发现miRNA205在大肠癌中低表达,表明miRNA205在大肠癌的发生中可能发挥抑癌基因的作用。2、miRNA205能抑制大肠癌细胞HCT116的克隆形成和迁移能力,深入研究miRNA205抑癌机制可以为阐明大肠癌发病机制提供理论依据,并能对大肠癌患者的治疗提供新的思路。