食管癌（Esophageal cancer）是一种复杂的消化道恶性肿瘤,严重威胁人们的身体健康。由于其早期症状不典型,且侵袭性较强,患者的生存率较低。在治疗方面,食管癌主要采用手术干预及术后放化疗等综合治疗手段,但常规化疗药物毒副作用较大、易产生耐药性等因素限制了其在临床的广泛应用。因此,迫切需要寻找低毒和抗肿瘤活性较好的药物。苦参碱（Matrine）是一种从苦参属植物中分离出来的活性生物碱,具有广泛的生物学特性。有研究发现苦参碱可诱导肿瘤细胞发生自噬,进而抑制肿瘤细胞增殖,但其潜在的机制尚未阐明。自噬（Autophagy）是细胞利用溶酶体降解细胞质的过程,有助于维持细胞代谢活动的平衡。在肿瘤中研究自噬的发生、发展、调控机制具有十分重要的意义。目的:探讨苦参碱是否诱导食管癌Eca-109细胞发生自噬及相关机制,为其作为食管癌辅助化疗药物提供一定的理论支持。方法:实验第一部分,将不同浓度苦参碱作用于Eca-109细胞,并进行分组:对照组、低浓度苦参碱干预组（1.0 mg/ml）、中浓度苦参碱干预组（1.5 mg/ml）、高浓度苦参碱干预组（2.0 mg/ml）,倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化,四甲基偶氮唑盐（MTT）实验检测细胞的增殖情况。运用透射电镜（TEM）观察细胞的超微结构。免疫细胞化学染色和免疫荧光细胞化学染色检测各组细胞微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain3,LC3）的定位和表达情况。免疫蛋白印迹（Western blot）技术检测各组细胞LC3蛋白和多聚蛋白62（P62）的表达情况。实时荧光定量PCR（RT-q PCR）技术检测各组细胞自噬相关基因Beclin1的表达情况。实验第二部分,将细胞分为对照组、自噬抑制剂组、苦参碱组和自噬抑制剂+苦参碱组,细胞划痕实验检测细胞的迁移情况。免疫细胞化学染色法和免疫荧光细胞化学染色法检测LC3蛋白的定位和表达情况。Western blot实验检测LC3、Beclin1和肝激酶B1/腺苷酸激活的蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（LKB1/AMPK/m TOR）通路相关蛋白的表达情况。结果:第一部分,对照组细胞生长状态良好,贴壁紧密,呈长梭形。随着苦参碱浓度增大,细胞逐渐变圆,细胞数量逐渐变少,形态逐渐变小。MTT结果显示,随着浓度的升高和时间的延长,Eca-109细胞增殖抑制率显著升高。与对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.01）。TEM结果显示,对照组细胞形态正常,苦参碱组细胞胞质中出现较多自噬泡和明显的自噬体。免疫细胞化学染色和免疫荧光细胞化学染色结果显示,各组中均可见LC3蛋白定位于细胞胞质中,其中高浓度苦参碱干预组阳性表达最高且荧光斑点最多,而对照组细胞呈弱阳性或阴性表达。Western blot和RT-q PCR实验结果显示,与对照组相比,随着苦参碱浓度的升高,LC3-II/LC3-I蛋白和Beclin1的m RNA的表达量上调,P62蛋白的表达量下调;高浓度苦参碱干预组与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.01）。第二部分,细胞划痕实验结果显示:与对照组相比,苦参碱组愈合面积最小,而在自噬抑制剂组的愈合面积最大。免疫细胞化学染色和免疫荧光细胞化学染色结果显示:定位于细胞胞质中的LC3蛋白在苦参碱组阳性表达最高、荧光斑点最多,自噬抑制剂组阳性表达最弱、荧光斑点最少。Western blot实验结果显示:各组中均可见Beclin1、LC3、LKB1、磷酸化的肝激酶B1（p-LKB1）、AMPK、磷酸化腺苷酸激活的蛋白激酶（pAMPK）、m TOR和磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-m TOR）蛋白的阳性表达,其中Beclin1、LC3-II/LC3-I、p-LKB1/LKB1和pAMPK/AMPK蛋白在苦参碱组表达量最高,在自噬抑制剂组的表达量最低;而p-m TOR/m TOR蛋白在苦参碱组的表达量最低,在自噬抑制剂组的表达量最高;苦参碱组与对照组相比,差异均具有统计学意义（P＜0.01）。结论:1.苦参碱在体外可抑制食管癌Eca-109细胞增殖和迁移,并诱导其发生自噬。2.苦参碱可能是通过调节LKB1/AMPK/m TOR信号通路蛋白的表达诱导食管癌Eca-109细胞发生自噬。