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研究背景:在血管再狭窄形成过程中,血管中膜平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell, VSMC)向内膜下迁移并在内膜中增生是关键步骤。与细胞运动直接相关的肌动蛋白细胞骨架参与了VSMC迁移过程,从而促进再狭窄的发生。已知与肌动蛋白相关的细胞结构主要有:丝状伪足(Filopodia)、板状伪足(Lamellipodia)、粘着斑(Focal adhension)和张力纤维(Stress fiber)。近年来的研究表明,Rho家族小G蛋白是细胞骨架肌动蛋白的重要调节因子,目前众多的研究集中在Rho小G蛋白家族成员中的Cdc42、Rac1和RhoA,其中Cdc42促进丝状伪足的形成,Rac1调节板装伪足的生成和膜皱缩,RhoA则促进粘着斑连接和张力纤维的装配。我们考虑在不同细胞类型以及不同活性物质作用下,小G蛋白信号转导途径可不同。因此,研究小G蛋白介导的人血管平滑肌细胞的细胞骨架构建的变化,有助于揭示血管再狭窄过程中VSMC迁移的信号转导机制。第一部分 IL-1α、PDGF-BB及LPA诱导的细胞骨架的构建目的:研究激活Rho家族小G蛋白的不同细胞因子所诱导的细胞骨架构建变化。方法:本研究用激活Rho家族小G蛋白的细胞因子白细胞介素1α(IL-1α)、血小板源性生长因子(PDGF-BB)及溶血磷脂酸(LPA)诱导原代培养的人血管平滑肌细胞,免疫荧光标记与运动有关的肌动蛋白细胞骨架结构,激光共聚焦显微镜在不同时间点观察人VSMC细胞骨架构建变化情况。结果:IL-1α诱导10分钟后出现丝装伪足,20分钟时出现板装伪足,30分钟时出现张力纤维和明显的粘着斑。PDGF-BB诱导5分钟后出现板装伪足,15分钟时出现张力纤维及粘着斑,30分钟时较前无明显改变。LPA诱导20分钟时出现张力纤维及粘着斑。结论:IL-1α、PDGF-BB及LPA诱导后VSMC细胞骨架构建出现规律性的变化,提示Rho家族小G蛋白存在级联瀑布式的反应顺序。