【摘 要】
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一、MBP的提取、鉴定和EAE模型建立 MBP的提取参照Kies法并稍加改进.提取以牛脊髓为原料,通过反复脱脂、抽滤、酸溶解抽提出MBP,再用SDS-PAGE对所抽提的MBP进行了鉴定,结果表
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一、MBP的提取、鉴定和EAE模型建立 MBP的提取参照Kies法并稍加改进.提取以牛脊髓为原料,通过反复脱脂、抽滤、酸溶解抽提出MBP,再用SDS-PAGE对所抽提的MBP进行了鉴定,结果表明该实验所抽提的MBP分子量在14.4~20.1kD之间,符合预期值.同时,经过反复摸索,用提取的MBP免疫豚鼠,成功建立了EAE模型,一方面证实了该研究建立的方法所制备的MBP具有较高的致EAE活性;另一方面EAE模型的建成,为该课题组研究自身免疫性疾病的生物治疗法建立了一种良好的动物模型,也为该室后续的治疗性研究提供了实验基础.二、DT390-IL2重组质粒的提取和EAE的治疗性实验 该实验采用亚精胺法来提取DT390-IL2重组质粒,通过质粒DNA的双酶切鉴定,证实了所提取的质粒的正确性,并通过紫外分光光度法证实其纯度也较高.同时,该实验还对亚精胺法和该室常用的商品化的质粒大抽试剂盒(如Qiagen plasmid Maxi Kit)进行比较,结果表明,两种方法制备的质粒DNA纯度相近,但要获得相同数量的质粒,亚精胺法的花费却不到Qiagen试剂盒的十分之一,说明亚精胺法是大量制备质粒DNA的一种高效而又经济的方法,值得推广应用.在EAE的治疗性实验中,从注射MBP抗原第2天开始,分别将裸质粒DT390-IL2和PLGA(聚丙交酯乙交酯)包被质粒DT390-IL2经肌肉注射入豚鼠体内,通过观察豚鼠临床症状和中枢神经组织病变情况,发现三个治疗组豚鼠的EAE症状比未治疗组豚鼠均有明显减轻甚至完全康复,初步表明DT390-IL2重组质粒治疗EAE有效,为临床治疗EAE和多发性硬化(MS)提供了实验依据.
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