PCV2 ORF2的大肠杆菌表达和T4噬菌体展示及ELISA方法的建立

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首次对广东省的PCV2的分子流行病学情况进行了初步探讨,并结合各毒株的流行病学情况进行了分析比较。对广东省各地流行的PCV2进行了病原分离和鉴定,共分离到9株PCV2广东地方流行毒株;并以9株PCV2广东分离株为研究对象,分两段扩增PCV2全基因组片段,并将9个病毒的PCR DNA片段分别克隆至pGEM-T Easy载体中进行序列测定,得到9个毒株的全基因序列。结果表明,9个毒株全基因组均为1 767bp,9个PCV2广东地方分离毒株彼此间的核苷酸序列的一致性在95.6﹪以上,与从国内各地分离的其它毒株的关系密切(一致性在95.4﹪以上),与国外各毒株的全基因组序列一致性也在94.9﹪~99.9﹪之间。与GenBank上收录的其它18个参照株比较发现,PCV2 ORF2基因变化较大,各毒株ORF2(编码病毒衣壳蛋白)的核苷酸序列一致性在91.0﹪~100﹪之间,氨基酸的一致性在90.2﹪~99.1﹪之间,通过对病毒衣壳蛋白的氨基酸序列比较,发现在第53~91位残基处差异显著,在第121-136位和第169~191位差异也较大。 首次将纯化后的融合蛋白pET-△CAP作为包被抗原,初步建立了检测PCV2抗体的ELISA方法。本试验建立的两种ELISA具有较高的灵敏性、特异性和准确性,有望成为良好的PCV2ELISA试剂盒。
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