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研究背景及目的子痫前期（Preeclampsia,PE）是一种妊娠期特有的并发症,是全球2%～8%孕产妇发病和死亡的主要原因之一。目前,PE具体的发病机制尚缺乏全面的认识,且临床上对PE的治疗手段十分有限,终止妊娠仍是唯一的治愈方式。PE作为代表性的胎盘源性疾病,且胎盘是妊娠特有的器官,因此,探索胎盘与PE之间的相关分子机制仍是目前研究的焦点。胎盘滋养细胞的侵袭能力受损被视为PE的最重要发病机制之一。PE胎盘中滋养细胞的侵袭能力受损可能与其自身细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）产生过多及降解ECM的基质金属蛋白酶（Metalloproteinases,MMPs）酶活性不足有关。上皮-间质转化（epithelial-to-mesenchymal transition,EMT）过程异常也会导致胎盘滋养细胞的侵袭能力受损。确定胎盘滋养细胞中ECM的产生与降解以及EMT的分子调控机制将有助于阐明PE中滋养细胞侵袭能力受损的潜在原因。亲环蛋白A（Cyclophilin A,CyPA）是一种具有肽基脯氨酰异构酶活性并在细胞内普遍存在的蛋白质,也是免疫抑制药物环孢素A（CyclosprineA,CsA）的胞质结合蛋白。CyPA具有多种生物学功能,并参与了多种疾病的发生发展。近年来,已有相关临床研究发现CyPA在重度PE患者的血清及胎盘中表达上调。然而,CyPA参与PE发生发展的机制仍然未知。因此,本研究将从临床标本、细胞及动物三个层面出发,进一步阐明CyPA是通过调控何种途径参与PE的发生发展的。研究内容与方法1.采用RT-qPCR,WB,免疫组化及免疫荧光实验评估CyPA在重度子痫前期与正常胎盘中的表达差异与定位,pearson相关系数分析评估CyPA表达与孕妇血压的相关性。2.用不同浓度的人CyPA重组蛋白（200ng/mL、500ng/mL及1000ng/mL）刺激HTR8/SVneo细胞24小时后,用EdU、流式细胞术及Transwell法检测不同浓度的CyPA对滋养细胞增殖、周期、凋亡、迁移及侵袭的影响。3.探究CyPA对孕鼠血压、蛋白尿、胎儿生长发育情况的影响,并用HE染色评估孕鼠胎盘形态学的改变。提取孕鼠胎盘RNA,进行转录组测序明确CyPA所引起的下游通路变化。4.构建稳定CyPA过表达或敲低的细胞系,根据测序结果提示,使用Masson染色,免疫组化和/或RT-qPCR、WB实验检测CyPA对小鼠胎盘及人滋养细胞系HTR8/SVneo ECM相关蛋白、EMT标志物及TGF-β/smad3信号通路的影响,Transwell法检测CyPA对滋养细胞迁移及侵袭的影响。5.对稳定过表达CyPA的滋养细胞使用TGFBR1抑制剂SB431542后,用RT-qPCR、WB检测ECM相关蛋白、EMT标志物及TGF-β/smad3信号通路的表达变化,Transwell法检测滋养细胞迁移及侵袭能力的变化。6.使用Co-IP与LC-MS/MS技术寻找与验证在HTR8/SVneo细胞中与CyPA相互作用的蛋白,采用RT-qPCR,WB及免疫组化及免疫荧光实验评估该蛋白在重度子痫前期与正常胎盘中的表达差异。对稳定过表达CyPA的滋养细胞敲低该蛋白后,用RT-qPCR、WB检测ECM相关蛋白、EMT标志物及TGF-β/smad3信号通路的表达变化,Transwell法检测滋养细胞迁移及侵袭能力的变化。研究结果1.CyPA在重度PE胎盘中的表达水平较正常妊娠显著上调,且胎盘中各层细胞均表达CyPA。另外,CyPA的表达水平与孕妇的血压显著正相关。2.CyPA可浓度依赖性抑制HTR8/SVneo细胞的增殖、迁移及侵袭能力,但对其细胞周期与凋亡的影响并不显著。3.CyPA可诱导孕鼠出现高血压、FGR等PE样症状,造成孕鼠胎盘迷路区/连接区比值的增加的结构性改变、坏死面积增加。4.CyPA可引起小鼠胎盘转录组水平发生变化,上调的差异基因富集在ECM形成、ECM成分形成及间质-上皮转化相关等通路。5.CyPA可上调小鼠胎盘中ECM相关蛋白的表达,并激活TGF-β/Smad3信号通路的表达,同时抑制小鼠胎盘中EMT标志物及MMP-2与MMP-9的表达。6.过表达CyPA可上调滋养细胞HTR8/SVneo中ECM相关蛋白及TGF-β/Smad3信号通路的表达,抑制滋养细胞的EMT相关基因及MMP-2与MMP-9的表达,并显著抑制滋养细胞的迁移及侵袭能力。敲低CyPA则对HTR8/SVneo细胞具有相反的效应。7.使用TGFBRI的抑制剂SB431542可以阻断CyPA导致ECM相关蛋白异常激活与EMT过程受损的作用,并改善滋养细胞迁移及侵袭能力。8.CyPA可与SERPINH1相互作用。SERPINH1在重度PE胎盘中的表达水平显著上调,且与孕妇血压及CyPA的表达呈正相关。在过表达CyPA的滋养细胞中敲低SERPINH1的表达,可逆转CyPA对TGF-β/Smad3信号通路、ECM蛋白、EMT标志物及滋养细胞迁移与侵袭能力的效应。研究结论1.CyPA在重度子痫前期胎盘中的表达显著上调。2.CyPA可诱导孕鼠出现高血压、FGR等PE样症状,造成孕鼠胎盘迷路区/连接区比值的增加的结构性改变、坏死面积增加。3.CyPA通过上调TGF-β/Smad3通路导致小鼠胎盘与人滋养细胞HTR8/SVneo的ECM蛋白表达上调及EMT过程受损,并破坏人滋养细胞HTR8/SVneo的迁移及侵袭能力。4.CyPA与SERPINH1相互作用介导人滋养细胞HTR8/SVneo的ECM蛋白表达上调及EMT过程受损,并破坏人滋养细胞HTR8/SVneo的迁移及侵袭能力来共同介导PE的发生发展。