自噬相关蛋白及P-MLC在大鼠非酒精性脂肪性肝纤维化中的表达及意义

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目的(1)探讨运用高脂饮食联合小剂量四氯化碳(CCl4)复制大鼠肝纤维化模型的特点。(2)观察自噬标记物微管相关蛋白轻链3(LC3)和溶酶体相关膜蛋白LAMP-2A在该纤维化模型中的表达及意义。(3)观察磷酸化肌球蛋白轻链[P-MLC (Thr18/Ser19)]在该纤维化模型中的表达及意义。方法(1)70只SD大鼠随机分为正常对照组(N)、CCl4组(M1)和高脂饮食联合小剂量CCl4组(M2)。N组皮下注射花生油3ml/kg,2次/周;M1组采用400ml/L CCl4花生油混合液,3ml/kg,2次/周皮下注射;M2组采用高脂饮食联合小剂量CCl4造模,其CCl4用量2ml/kg,浓度和频次同M1组。造模后8周末、10周末分批处死,检测肝功能、血脂、光镜观察大鼠肝脏脂肪变性及肝纤维化程度。(2)免疫组化法检测肝脏P-MLC及LC3的表达;ELISA法测肝脏LAMP-2A的含量。结果(1)与N组比较,8周和10周末,M1及M2组血清球蛋白(GLO)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平及肝脂肪变性和纤维化程度均升高(P<0.05, P<0.01),但白球比值(A/G)下降(P<0.05, P<0.01)。8周末,M2组ALT、AST低于M1组(P<0.05),脂肪变性程度高于M1组(P<0.05);10周末,M2组白蛋白(ALB)、A/G低于M1组(P<0.05),而ALT、AST高于M1组(P<0.01);8周和10周末M2组肝纤维化程度均强于M1组(P<0.05)。8周和10周末M2组TC显著高于N组及M1组(P<0.05,P<0.01),但N组与M1组之间无显著差异。8周末血清TG在N、M1、M2三组之间无显著差异。10周末血清M1、M2组TG均显著低于N组(P<0.01),但M1、M2之间无显著差异。(2)在8周和10周末,M1、M2组LC3表达水平均高于N组,且M1组高于M2组(P<0.05, P<0.01);而随着时间的进展,M1和M2组在10周末的LC3表达水平均低于8周末(P<0.01)。(3)在8周和10周末,M1、M2组LAMP-2A的含量均高于N组(P<0.05, P<0.01),但M2组LAMP-2A的含量低于M1组(P<0.01);而随着时间的进展,同一组大鼠在10周末LAMP-2A的含量低于8周末(P<0.05, P<0.01)。(4)在8周和10周末,M1组P-MLC表达水平高于N组(P<0.05, P<0.01),但均明低于M2组(P<0.05, P<0.01);而随着时间的进展,M1和M2组在10周末的P-MLC表达水平均高于8周末P<0.01)。结论(1)高脂饮食联合小剂量CCl4皮下注射复制大鼠肝纤维化模型,具有造模时间短,成功率高的优点。(2)随着肝纤维化的进展,LC3的表达减弱,提示在非酒精性脂肪性肝纤维化的发展中存在肝脏自噬能力下降,自噬在肝纤维化中可能起到保护作用。(3)随着肝纤维化的进展,LAMP-2A的含量下降,并与LC3的表达减弱相一致,提示引起LAMP-2A的降低可能是导致非酒精性脂肪性肝纤维化肝脏自噬下降的原因之一。(4)P-MLC的表达随着肝纤维化的进展而增加,P-MLC在非酒精性脂肪性肝纤维化的发展中起着一定的作用。(5)高脂饮食可加重CCl4所致的非酒精性脂肪性肝纤维化,可能与其进一步降低LC3表达和LAMP-2A含量和升高P-MLC表达有关。
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