土壤放线菌Ⅲ-172次级代谢产物的分离、纯化及结构鉴定

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从上海南方农药研究中心得到一批长川霉素产生菌的诱变菌株,对它们分别进行发酵培养,对发酵液进行一系列处理,然后测试各部分的生物活性,以抑菌活性强弱和菌株斜面生长情况作为筛选指标,最终筛选到了一株土壤放线菌Ⅲ-172,其代谢产物对植物病原真菌具有较强的抑制作用。本文对土壤放线菌Ⅲ-172的抑菌活性组分进行了分离纯化及活性研究。在进行发酵之前,对某些培养条件简单做了一下优化,比如说确定发酵时间以及有机萃取相。经过活性比较,确定菌株的最佳发酵时间为7天,最佳的有机萃取溶剂是正丁醇。接着用优化的培养条件对土壤放线菌Ⅲ-172进行发酵培养,全程结合植物病原真菌的生物活性的跟踪测试,以长川霉素做为比对标准,通过冷冻高速离心、有机溶剂分层萃取和浸取、硅胶柱层析、薄层层析、旋蒸浓缩、高效液相色谱分析与制备等一系列的分离纯化方法,逐渐对其发酵代谢产物中的活性组分进行分离纯化。在展开剂比例为CH2Cl2:CH3OH=10:1,Rf值为0.43左右,薄层层析板上出现了活性条带5。对条带5进行高效液相色谱分析,在流动相是10%的甲醇,保留时间为24-26 min之间时,分离得到了一个独立的活性峰。接着就进行高效液相色谱制备,把制备出来的抑菌的活性化合物命名为Ⅲ-172-Ⅰ-a。经高效液相色谱分析仪测试,化合物的纯度为92.9%。紧接着对其进行质谱与核磁共振分析。通过UV、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR等一系列的谱图对其进行结构鉴定,解析出化合物的分子量为138.1,分子式为C8H10O2。查找相关资料,了解了该化合物的一些基本性质,比如熔点为85℃,沸点为310℃,在水,乙醇,乙醚,丙酮等物质中都可以溶解。最后还通过生物活性测定,确定了其对病原指示菌Po的最低抑菌浓度MIC为31.25ppm。提取出来的化合物Ⅲ-172-Ⅰ-a对常见的病原指示菌Po有较强的抑制活性。测试了最低抑菌浓度MIC,这使得其以后能更经济地应用到农业生产中。
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