头花蓼又名太阳草、石莽草、水绣球等,为蓼科植物头花蓼(Polygonum capitatum Buch.-Ham.ex D.Don)的干燥全草或地上部分。全草入药,味苦、辛,性凉。头花蓼主要含有黄酮类、酚酸类、木脂素类等化合物;现代药理研究表明,头花蓼具有抗菌、抗炎镇痛、抗氧化、降糖等药理作用。课题组前期研究发现,以Davidiin为代表的多酚具有很好的降糖作用,且含量均高于没食子酸、槲皮苷等物质,具有很好的开发研究价值。因此,本文以Davidiin为研究对象,对其制备工艺及在糖尿病模型下的代谢产物进行考察。一、头花蓼药材的含量测定。目前,头花蓼被收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准(2003年版)》、《湖南省中药材标准(2009年版)》,含量测定项中供试品溶液制备使用了盐酸水解方法,药材中槲皮苷等成分水解产生槲皮素,以槲皮素为指标进行药材质量控制。以头花蓼为原料的单方制剂热淋清颗粒(收载于《中国药典》2015年版)的含量测定项以没食子酸为质控指标。为完善质量标准,本研究以没食子酸、Davidiin、槲皮苷为指标,建立HPLC(高效液相色谱法)含量测定方法。采用Waters Atlantis T3(4.6x250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.2%甲酸水(B)梯度洗脱(0-10 min,7%A-15%A;10-30 min,15%A-20%A;30-45,20%A-25%A),流速1.2m L/min,进样量10μL,检测波长280 nm,柱温为室温。结果表明,头花蓼药材中没食子酸、Davidiin、槲皮苷分别在0.0380～0.2280μg、0.3560～2.1360μg、0.0684～0.4140μg范围内呈良好的线性关系,相关系数在0.9996～0.9998之间;平均加样回收率(n=6)分别为101.96%、98.77%和106.26%。通过比较不同提取方法,确定加热回流方法提取,对提取时间、甲醇浓度进行优化,确定供试品制备方法;共测定13批头花蓼药材,没食子酸含量范围为0.2715～1.1167 mg/g,Davidiin含量范围为1.6910～10.9266mg/g,槲皮苷含量范围为0.7236～3.2265 mg/g。该方法简便可行,可适用于头花蓼药材的含量测定和质量控制。二、头花蓼多酚Davidiin的提取工艺研究。通过考察不同提取方法,确定加热回流方法提取Davidiin,以不同的乙醇浓度、液料比、提取时间为单因素,以Davidiin含量为指标,考察各因素对提取率的影响,在单因素实验基础之上通过响应面实验设计优化Davidiin的提取工艺,以确定最佳提取条件。最佳工艺条件为65%乙醇、液料比24(m L/g)、提取时间60min,提取次数为1次;在此最佳工艺条件下,Davidiin的提取率可达95.46%。按照最佳提取工艺放大实验后,Davidiin提取率为85.62%,三、头花蓼多酚Davidiin的大孔树脂纯化工艺研究。按照最佳提取工艺提取后的浓缩液为上样液,以Davidiin转移率和纯度为综合评价指标,通过静态吸附实验筛选出HPD-750为最佳树脂,通过动态吸附实验对上样浓度、流速、径高比、上样量等因素进行考察,得到最佳纯化工艺为:上样浓度2.37 mg/m L,流速3 BV/h,径高比1:1.5,上样量3BV,水洗脱12倍柱体积,15%乙醇洗脱12倍柱体积,25%乙醇洗脱7倍柱体积,90%乙醇洗脱10倍柱体积,流速3 BV/h,收集25%乙醇洗脱部分,浓缩至干,Davidiin的转移率为80.61%,纯度为74.23%。按照最佳纯化工艺放大实验后,Davidiin在整个提取纯化过程中转移率为60.99%,纯度为72.47%。四、头花蓼多酚Davidiin在SD大鼠糖尿病模型下代谢产物鉴定研究。以高脂饲料联合链脲佐菌素建立SD大鼠糖尿病模型,饲养于代谢笼中,连续给药4周,每天上午8时进行灌胃给药,Davidiin组按90 mg/kg的剂量给药,模型组灌胃同体积的生理盐水。收集尿液、粪便、血液样品,通过超高效液相-四级杆-飞行时间-质谱联用技术(UHPLC-Q-TOF-MS)检测,鉴定其主要代谢产物,推测在糖尿病模型下的转化途径。结果表明,在血液中未发现Davidiin及相关代谢产物,在尿液中共发现6个代谢产物,口服给药后,主要发生(40)相代谢的水解反应,生成极性小分子,再与葡萄糖醛酸、磺酸结合,发生Ⅱ相代谢反应,形成大极性物质,由尿液排出。综上所述,本文主要研究了多酚Davidiin的提取、纯化工艺,为之后大规模的制备提供依据,同时,进行了Davidiin在糖尿病模型下的代谢研究,为Davidiin的降糖活性机制研究奠定理论基础。