糖尿病创面具有复杂的微环境,例如高血糖、缺氧和高活性氧（ROS）等,进而导致创面难以愈合。因此,通过调控糖尿病创面微环境从而促进糖尿病创面愈合是一种有潜力的策略。在此,本文开发了基于铈离子介导的特殊双配体（阿仑膦酸和2-甲基咪唑）和葡萄糖氧化酶（GOx）,通过共组装形成多功能纳米酶（CHA@GOx）用于糖尿病创面的修复。该纳米酶不仅具有超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）模拟活性,可有效去除创面多余的ROS,还可以级联催化葡萄糖氧化反应产生的过量过氧化氢进而产生氧气,降低GOx带来的毒副作用的同时改善创面缺氧,从而达到协同修复糖尿病创面的目的。体内实验表明,CHA@GOx有助于细胞迁移,诱导血管生成、胶原沉积和再上皮化。综上所述,本文开发的多功能纳米酶在糖尿病创面的修复中具有潜在的作用。其主要研究内容如下:（1）CHA@GOx的制备和表征:通过控制变量法确定了双配体AL和HMIM的浓度均为10mg/m L时可合成稳定的纳米颗粒。随后采用共价配位的方式合成纳米颗粒CHA,并添加GOx共组装形成纳米酶CHA@GOx。此外,通过CHA装载不同的染料小分子以及AL和HMIM与不同的金属离子共价结合,验证了CHA的载药能力和该双配体策略的潜在通用性。进一步通过透射电子显微镜和原子力显微镜对该纳米酶的形貌、粒径大小进行观察,发现CHA和CHA@GOx均为分散均匀的球形纳米颗粒,其粒径分别在8 nm和20 nm左右。最后水合粒径以及紫外和红外光谱的结果均证明GOx的成功装载。（2）CHA@GOx酶学活性研究:多种酶活性是CHA@GOx调节糖尿病创面微环境的关键。首先通过ICP-MS测定了该体系溶液中铈离子的浓度为3.5 m M,为后续定量设计实验提供了依据。X射线光电子能谱的结果显示铈离子的表面两种价态共存,其中三价态占比57.5%,四价态占比42.5%,为铈纳米酶的多种酶活性提供了证明。进一步采用淡蓝四唑法验证了CHA@GOx的SOD活性,当铈离子的浓度为0.5μM时,其SOD酶活性依然能达到33%左右。此外,通过溶氧仪评估了CHA@GOx催化过氧化氢产氧的能力,在15分钟内溶液中含氧量可增加30%左右。最后,在CHA@GOx溶液中加入葡萄糖并测定其p H值的变化,表明装载的GOx能够维持其活性。（3）CHA@GOx对细胞的影响:采用CCK-8分析评估了CHA@GOx对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）和小鼠成纤维细胞（NIH-3T3）的活力影响,并确定后续细胞实验的给药浓度为5μM。其次通过活性氧探针和氧气探针分别测量了细胞内的ROS和氧气含量,验证了CHA@GOx的浓度为5μM时可清除细胞内60%左右的ROS,并且具有调节氧气平衡的能力。最后划痕实验的结果表明CHA@GOx可促进小鼠成纤维细胞迁移,迁移率为90%左右。同样的,成管实验证明了CHA@GOx具有促进人脐静脉内皮细胞成管的效果,其中管长和小管连接较PBS组分别增加了90%和20%左右。（4）CHA@GOx对创面的修复:首先采用活体成像的方法评估了CHA@GOx在体内的代谢情况,同时测定血常规、生化、皮肤组织及主要器官的H＆E染色等指标,证明了CHA@GOx的体内安全性。其次,建立正常小鼠创面,确定了给药方案为前3天连续给药并持续14天观察创面愈合情况。最后建立糖尿病小鼠模型及糖尿病小鼠创面模型,通过监测治疗期间小鼠体重、血糖和创面愈合情况,并进一步测定不同时间点创面皮肤组织相关指标,如上皮化、胶原沉积、血管生成和ROS水平等,证明了CHA@GOx对创面愈合的促进作用。