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目的:骨癌痛（Bone Cancer Pain,BCP）是癌症晚期患者最棘手的症状之一,严重影响患者的日常生活,降低患者的生活质量。研究表明,小胶质细胞嘌呤能受体P2X7（Purinergic Receptor P2X7,P2X7R）可以调节神经病理性疼痛和关节疼痛。然而,P2X7R在BCP中的具体作用和潜在的分子机制尚未阐明。因此,本研究旨在探讨P2X7R参与BCP的潜在机制,我们通过将Walker 256乳腺癌细胞注入雌性大鼠胫骨骨髓腔建立BCP动物模型,给予P2X7R特异性抑制剂亮蓝G（Brilliant Blue G,BBG）观察其对骨癌痛大鼠的镇痛作用、探讨其镇痛机制是否与抑制核因子 κB（nuclear factor kappa-B,NF-κB）和 Nod 样受体蛋白 3（Nod-lik e Receptor Protein 3,NLRP3）信号通路以及小胶质细胞活化有关。方法:1.将雌性SD大鼠随机分为两组:假手术组（Sham）和骨癌痛组（BCP）。根据文献方法建立大鼠乳腺癌骨转移模型,分别在术前,术后4、7、11、14、17、21 天用机械性缩足阈值（Paw Withdrawal mechanical Threshold,50%PWT）和自发抬足次数（Number of Spontaneous Flinches,NSF）评估大鼠疼痛行为。在术后21天,通过对大鼠胫骨进行X线拍摄来判断骨质破坏程度,对胫骨HE染色来观察肿瘤浸润情况,验证是否成功建立大鼠骨癌痛模型。2.将雌性SD大鼠随机分为四组:假手术组（Sham）、骨癌痛7天组（BCP7d）、骨癌痛14天组（BCP14d）、骨癌痛21天组（BCP21d）。提取各组大鼠L4-L6脊髓节段组织,Western blot检测P2X7R和小胶质细胞标记物Iba-1的表达情况。3.将雌性SD大鼠随机分为四组:假手术组（Sham+Veh）、假手术给药组（Sham+BBG）、骨癌痛组（BCP+Veh）、骨癌痛给药组（BCP+BBG）。分别在术前,术后4、7、11、14、17、21天用50%PWT和NSF评估大鼠疼痛行为,大鼠出现疼痛行为后每天腹腔给予P2X7R抑制剂BBG。首次给药时分别在给药前,给药后1h、2h、4h、6h、8h测量大鼠机械性缩足阈值确定达到药效高峰的时间。4.利用Western blot方法检测相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1、NF-κB和下游疼痛因子IL-1β的表达情况,免疫荧光双染方法检测小胶质细胞活化情况以及P2X7R和小胶质细胞共定位情况。结果:1.通过将Walker 256乳腺癌细胞注射到大鼠胫骨骨髓腔,成功建立大鼠骨癌痛模型。与假手术组相比,骨癌痛组动物同侧后肢50%PWT显著降低,NSF显著增多。X线结果显示骨癌痛组大鼠胫骨出现骨质破坏,HE染色结果显示骨癌痛组大鼠肿瘤细胞完全浸润胫骨骨髓腔。2.Western blot结果显示,与假手术组相比,骨癌痛14天组和骨癌痛21天组大鼠脊髓P2X7R和Iba-1的蛋白表达显著增加。3.BBG在给药后2h达到药效高峰,经BBG治疗的骨癌痛大鼠50%PWT值显著增高,NSF明显降低。免疫荧光双染结果表明P2X7R和小胶质细胞共定位,且BBG能显著降低骨癌痛大鼠小胶质细胞的激活。4.Western blot结果显示与假手术组和假手术给药组相比,骨癌痛组NLRP3、ASC、Caspase-1、NF-κB和下游疼痛因子IL-1β的表达显著增加。骨癌痛给药组上述蛋白的表达水平明显下调。结论:1.骨癌痛组大鼠脊髓水平P2X7R和小胶质细胞标记物Iba-1表达上调,且P2X7R位于小胶质细胞上。2.在骨癌痛动物模型的基础上证实了 P2X7R抑制剂BBG可以减轻骨癌痛大鼠疼痛行为,表现为50%PWT的升高和NSF的降低,其作用机制可能与抑制NF-κB和NLRP3信号通路以及小胶质细胞活化有关。这表明NF-κB和NLRP3炎症小体信号通路的激活可能通过调节小胶质细胞的活性促进大鼠的骨癌痛。