研究背景Alport综合征是一种以血尿最为常见,同时伴有蛋白尿和进行性肾功能减退的遗传性肾小球疾病,常伴有或不伴有感音神经性耳聋和前锥形晶状体等其他肾外症状,其主要特征是肾小球基底膜（glomerular basement membrane,GBM）的异常。研究发现Alport综合征大约85%是由COL4A5基因突变引起X连锁显性遗传病,大约15%是由COL4A3或COL4A4基因突变引起的常染色体隐性遗传病和常染色体显性遗传病。目前诊断Alport综合征主要依据临床症状、家族史、实验室检查、组织基膜Ⅳ型胶原α链免疫荧光学检查和肾组织活检电镜。虽然肾组织活检电镜及Ⅳ型胶原染色是诊断Alport综合征的重要指标,但对于某些病理改变不典型的疑似Alport综合征患者,需要进行基因测序进行诊断。目前遗传性疾病大多数以细胞或动物模型为基础进行实验研究,很难模拟基因突变在人体内的发病机制。保留了来源体细胞的遗传背景的人诱导性多能干细胞（human induced pluripotent stem cells,hiPSCs）成为一种新的遗传性疾病的研究模型,已经被应用于Ⅱ型长QT心脏病和镰状细胞性贫血症等多种疾病的发病机制和治疗研究。研究目的（1）利用基因测序对一名疑诊Alport综合征患者明确诊断并发现其致病突变;（2）建立该患者来源的特异性的hiPSCs。研究方法和结果（1）患者为一名25岁女性,尿潜血3+,尿蛋白3+,24小时尿蛋白定量3.2g/24h,伴有唇腭裂,无感音神经性耳聋。根据临床表现及肾脏病理,患者疑诊Alport综合征。（2）为进一步明确诊断,我们提取患者外周血DNA,并应用高通量基因测序对遗传性肾病相关致病基因进行测序,发现患者在COL4A3基因有两个杂合突变c.4243G＞C（p.G1415R）和c.4216G＞A（p.G1406R）。我们利用Sanger测序对患者和其家庭成员的这两个位点进行分析,发现患者的COL4A3基因c.4243G＞C突变来自患者父亲,COL4A3基因c.4216G＞A突变来自患者母亲。该家系属于常染色体隐性遗传Alport综合征。（3）我们采集患者静脉血,分离培养外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,通过电转转入表达转录因子OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC和LIN28的质粒将PBMCs重新编程为hiPSCs。通过免疫荧光染色、RT-qPCR、外源基因的检测、核型分析和支原体检测完成hiPSCs相关鉴定。鉴定结果显示,hiPSCs表面抗原TRA-1-60、TRA-1-81、SSEA4和转录因子OCT4、SOX2呈阳性染色;内源性多能性基因OCT4、SOX2和NANOG的表达与胚胎干细胞相似;传10代后hiPSCs仍保持核型正常;hiPSCs保留着亲代体细胞的基因突变。结论本研究应用基因测序对临床症状及肾脏病理疑似Alport综合征的患者明确诊断,发现了新的COL4A3基因的疑似致病基因突变。通过诱导性多能干细胞技术,建立患者特异性的hiPSCs,并完成了相关鉴定,为进一步研究Alport综合征的发病机制及治疗奠定了研究基础。