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目的:本研究拟通过检测骨髓增生异常综合症（MDS）与继发性急性髓系白血病（AML/MDS）患者骨髓标本中硫酸肝素蛋白多糖2（Heparan Sulfate Proteoglycan 2,HSPG2）表达变化,分析其与疾病临床特征及预后的关系。体外实验探究敲减HSPG2对AML/MDS细胞株的增殖、凋亡、周期等功能的影响,初步探索其对细胞凋亡、增殖等相关通路的作用机制。同时还将观察探究西达本胺（CDM）对敲减HSPG2后AML/MDS细胞生长功能的影响,并利用网络药理学初步探讨其潜在机制。方法:1.收集重庆医科大学附属第一医院血液内科2018年06月至2021年12月间住院的MDS与AML/MDS患者及门诊的阴性对照者的骨髓标本及相关临床数据。2.利用RT-qPCR及蛋白印记（WB）等实验方法,检测患者骨髓标本中HSPG2表达变化。3.通过ROC曲线分析、生存分析等方法,探索HSPG2表达差异与MDS、AML/MDS患者不同预后风险、不同疾病阶段、不同治疗转归等临床特征的相关性。4.利用RT-qPCR检测HSPG2在细胞株中的表达差异,选择HSPG2表达水平最高的细胞株为后续研究AML/MDS模型。5.进一步通过CRISPR/Cas9技术敲低AML/MDS细胞模型的HSPG2基因水平,并通过Sanger测序及WB检测验证成功构建HSPG2敲减细胞模型。6.通过CCK8检测细胞生长情况,比较敲减HSPG2对AML/MDS细胞株增殖等功能的影响,以及CDM对敲减HSPG2后的AML/MDS细胞株增殖功能的影响。7.通过流式细胞学检测,比较敲减HSPG2对AML/MDS细胞株凋亡及周期功能的影响。8.利用WB检测凋亡相关关键蛋白（Caspase3、Cleaved Caspase3、Cleaved Caspase9及Bax）的表达差异,以及利用RT-qPCR检测增殖相关Hippo信号通路关键效应分子（LATS1、LATS2、YAP1、TAZ）转录水平变化,初探HSPG2影响增殖、凋亡等功能的潜在机制。9.利用网络药理学策略初探CDM联合敲减HSPG2对AML/MDS增殖功能影响的潜在作用机制。结果:1.本研究共收集65例次骨髓标本,其中包括20例初诊MDS（7例LR-MDS及13例HR-MDS）,12例初诊AML/MDS,10例CR状态AML及3例复发AML患者,以及20例阴性对照患者。2.初诊HR-MDS患者骨髓标本中HSPG2转录水平较阴性对照组显著增高（P＜0.05）,且AML/MDS组标本中的HSPG2表达水平显著高于HR-MDS组（P＜0.05）。此外,相对于初诊AML/MDS组,在AML治疗CR后患者中的HSPG2转录水平显著下降（P＜0.01）,而在AML复发后患者中则再次增高（P＜0.05）。这些提示HSPG2可能参与MDS向AML/MDS转化过程。3.根据MDS及AML/MDS患者HSPG2表达差异进行全队列ROC曲线分析提示,AUC值为0.8542（P＜0.01）,根据约登指数得到最佳cutoff值是9.26。进而按照该cutoff值将患者按照HSPG2表达量分为高低组。结合临床资料分析发现,HSPG2高表达患者可能伴随更高的原始细胞数目（P＜0.01）、更低的血小板数目（P=0.02）,并有更短的OS及LFS（P＜0.01）。4.RT-qPCR检测发现,SKM-1细胞株是HSPG2转录水平最高（P＜0.01）的细胞株。其后基于CRISPR/Cas9慢病毒介导SKM-1细胞敲减HSPG2基因,Sanger测序从DNA水平证明目标sg RNA序列存在突变,而WB检测发现HSPG2蛋白水平下降,成功构建HSPG2敲减细胞模型（SKM-1-KD）。5.CCK8检测发现,与正常阴性对照组（NC）及空载对照组（VC）比较,SKM-1-KD组的SKM-1细胞增殖率,在48h及72h逐渐下降（P＜0.05）。此外,流式细胞学检测发现HSPG2敲减细胞的晚期及总凋亡率都显著升高（P＜0.01）,但在细胞周期检测无明显差异。6.进一步通过WB检测发现,敲减HSPG2会导致促凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspase3及Cleaved Caspase9表达增高（P＜0.05）。同时,RT-qPCR检测增殖相关Hippo通路关键分子转录水平,发现LATS1转录水平明显增高（P＜0.05）,而YAP1及TAZ转录水平下降（P＜0.05）,但KD组相较VC组在LATS2转录水平上无明显差异。7.CCK8检测发现,单独CDM干预SKM-1细胞,可以通过浓度、时间依赖性方式抑制其增殖,且48及72小时IC50分别为2.913μmol/l及1.138μmol/l。进一步研究发现,靶向敲减HSPG2联合CDM干预SKM-1细胞,相较于各自单一处理组而言,联合组的细胞增殖抑制率都明显增高（P＜0.01）,且同样有时间依赖性。8.进一步网络药理学分析发现,HSPG2与CDM之间的协同作用可能通过多条信号通路介导多项生物进程从而抑制AML/MDS细胞生长,为后续实验探索其具体机制提供了理论依据。结论:综上所述,本研究首次发现HSPG2在MDS及AML/MDS患者中过表达,且其表达水平与患者预后风险、治疗后疾病状态等临床结局关系密切。HSPG2高表达可能伴随更差的OS及LFS,有成为MDS预后不良生物标志物的潜力。此外,体外细胞实验成功构建基于CRISPR/Cas9敲减HSPG2的SKM-1细胞模型,并发现HSPG2敲减可能通过介导增殖相关Hippo信号通路,同时诱导凋亡相关途径从而抑制SKM-1细胞生长,并促进其凋亡增加。而进一步探究发现,靶向敲减HSPG2可增强西达本胺对SKM-1细胞的生长抑制,且网络药理学结果提示两者可能通过多条信号通路而共同发挥协同抗肿瘤作用,这为进一步深入探究HSPG2在MDS向AML/MDS转化过程中的作用机制及靶向治疗潜力提供了理论基础。