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背景:创伤性休克是一种临床上十分常见的创伤后危重病症。近十年来,随着分子生物学的发展,国内外学者更注重于从分子水平去探讨休克的发病机制,发现多种细胞因子、炎症介质等共同参与创伤性休克的发生发展过程。但是目前临床上治疗创伤性休克特别是重度、难治性休克的效果仍欠佳,其原因一是因为创伤性休克是一个受诸多因素影响、机制非常复杂的病理生理过程,而目前对其病理生理的确切机制认识仍不完善;二是缺乏针对其病理过程而采取的行之有效的干预、治疗手段。 一氧化氮(NO)是一种重要的血管活性分子,由L-Arg经NO合成酶(NOS)催化合成。近年来大量研究表明,NO在休克的病理生理过程中发挥了重要作用,与休克后血管反应性下降、器官功能衰竭及死亡率等密切相关。目前有关NO与休克方面的研究主要集中于脓毒性休克和单纯失血性休克,创伤性休克后各型NOS的合成情况及作用机理目前尚缺乏系统研究。 P-选择素是粘附分子家族中的一种,在介导白细胞与血管内皮接触、器官移植免疫排斥、肿瘤细胞的发育及新生血管形成方面起一定的作用。近年来,有研究表明在感染、创伤、出血及休克等病理条件下,P-选择素表现出十分重要的作用。但是,创伤性休克时P-选择素在组织中的分布、变化规律及程度国内尚未有报道。 目的 一、复制大鼠创伤性休克模型,检测大鼠脏器各型NOS活性的动态变化,探索创伤性休克后NO的合成机制;复苏时分别给予NOS抑制剂和NO供体L-精氨酸,通过检测其NOS的变化及观察大鼠存活率,探索创伤性休克后NO相关疗法的有效性,为临床应用提供实验依据。 二、检测创伤性休克大鼠血清及各脏器P-选择素的变化及分布,探讨粘附分子在创伤性休克时所起的作用及其机制,为临床休克治疗提供新的途径。方法和结果一、创伤性休克后脏器NOS的动态变化 通过外力致大鼠双侧股骨骨折,制作鼠创伤性休克模型。32只SD大鼠随机分为对照组(假手术组)、休克0.5h组、休克3h组和休克5h组,每组8只,分光光度法检测大鼠休克过程中肝脏、脾脏、肺脏、小肠、心脏等脏器cNOS和iNOS的活性。结果显示正常大鼠脏器中均有cNOS表达,肝脏、肺脏还可检测到少量iNOS;休克后0.5h,几乎所有脏器的cNOS均有不同程度的上升,其中肝脏、小肠与对照组比较明显升高,而脏器中iNOS却无明显变化;休克后3h,所有脏器的cNOS较对照组明显下降,而脏器中iNOS开始上升:休克5h,脏器中cNOS仍在下降,与休克3h比较有显著性差异,而脏器中iNOS较休克3h大幅度上升。另外,休克对心脏的NOS无影响。二、NOS抑制剂、L一精氨酸对创伤性休克的治疗研究 32只SD大鼠复制创伤性休克模型,随机分为对照组、AG组、L~NAME组、L一匆g组,每组8只。复苏时分别输注林格氏液,AG (loomg/kg)、L.NAME(10mg/kg)、L一A飞(100mg/kg),休克后sh,切取鼠肝、脾、小肠、肺、心组织,检测各内脏组织NOS活性。发现复苏时给予L一AME,各脏器iNOS和cNOS较对照组均明显下降;给予AG后,组织中cNOS明显上升,iNOS下降,与对照组比较尸叱0.01;给予L一Arg后,无论是iNoS还是cN0s均无明显变化。与此同时,观察到L一AME组大鼠存活时间、存活率与对照组比较无显著变化;而AG组和L~Arg组存活时间及存活率却明显上升。三、创伤性休克时P一选择素的变化及意义 复制创伤性休克模型,24只SD大鼠随机分为正常对照组、创伤休克组、L.A嗯治疗组(loomg飞g)。休克4h后ELIsA法检测各组大鼠血清P一选择素的变化,并采用免疫组织化学方法检测各组大鼠脏器P一选择素的分布及变化。结果表明:正常对照组血清中P一选择素含量呈中度表达,休克后4小时,血清P一选择素含量明显升高;L一Axg组休克后4小时P一选择素含量较休克组明显降低;免疫组化显示正常对照组P一选择素除了在肺脏支气管壁上有少量表达外,心脏、小肠均无阳性表达,创伤 4休克组P一选择素在心肌细胞、血管内皮细胞、支气管壁细胞及炎症细胞等胞浆中均有强烈表达,L~Arg治疗组可见阳性细胞及表达强度较休克组明显减少。肝脏在三组中均未见有P一选择素表达。结论一、创伤性休克时存在iNOS的大量表达,但不是在休克的早期,而在 休克的中期开始,休克晚期达到高峰。创伤性休克时,炎症因子释 放较晚可能是导致iNOS合成推迟的原因。二、休克早期,由于机体对创伤的适应调节,cNOS有轻度升高,但随 着休克的进展明显降低。三、L一沁g和AG可以提高创伤性大鼠的存活时间和生存率,L一AME 对生存时间和存活率无影响。然而,在应用Nos抑制剂和L.Arg治 疗时,应该根据休克的程度,适当掌握药物、剂量和给药时机,才 能取得好的治疗效果。四、创伤性休克时微循环紊乱和内皮功能障碍导致P一选择素的含量升高, P一选择素不仅在血管内皮细胞中表达,而且还在支气管细胞和心肌 细胞中表达。五、创伤性休克时给予L一抢g治疗后减少了P一选择素的表达,这可能是