【摘 要】
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研究背景:造影剂所致的急性肾损伤（Contrast-induced acute kidney injury,CI-AKI）是冠心病（coronary heart disease,CHD）患者经皮冠状动脉介入治疗（Percutaneous coronary intervention,PCI）后发生的常见的并发症,发生率可高达30%。Klotho是一种多功能蛋白,可抑制氧化应激和炎症反应,但其在CI-
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研究背景:造影剂所致的急性肾损伤（Contrast-induced acute kidney injury,CI-AKI）是冠心病（coronary heart disease,CHD）患者经皮冠状动脉介入治疗（Percutaneous coronary intervention,PCI）后发生的常见的并发症,发生率可高达30%。Klotho是一种多功能蛋白,可抑制氧化应激和炎症反应,但其在CI-AKI中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨klohto在CI-AKI中的作用及其相关机制。方法:将6周龄小鼠和人近曲小管上皮细胞（HK-2）细胞分为对照组（control）、造影剂组（CM）、造影剂干预后klotho治疗组（CM+klotho）、单纯klotho治疗组（klotho）。在体内实验中,肾脏组织的HE染色评价肾损伤,小鼠的血清中肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）指标反映小鼠的肾功能,肾组织的氧化应激采用二氢乙锭（Dihydroethidium,DHE）染色检测,通过检测肾脏焦亡相关蛋白的表达明确焦亡情况。在体外实验中,通过细胞增殖毒性检测（Cell Counting Kit,CCK-8）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性测定反映HK-2细胞活力和损伤情况。采用荧光探针二氯二氢二醋酸荧光素（2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate,DCFH-DA）和酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malonyl dialdehyde,MDA）等氧化应激相关指标。采用ELISA法检测细胞上清中白介素-6（interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）和白介素-18（interleukin-1β,IL-18）的含量反映炎症反应程度。碘化丙啶（propidiumiodide,PI）染色显示HK-2细胞死亡,取各组细胞总蛋白,通过蛋白免疫印迹（Western blot,WB）检测蛋白NF-κB、磷酸化NF-κB（p-NF-κB）的表达,以及NLRP3、caspase-1、GSDMD和cleaved-GSDMD的焦亡相关蛋白的表达情况。结果:1、体内实验中,control组与klotho组的肾脏情况良好,氧化应激和焦亡反应不高,CM组较control组中,肾组织病理改变明显,肾功能显著降低,肾脏的氧化应激反应增加,焦亡蛋白的表达也升高。CM+klotho组较CM组的肾脏病理改变减少,肾功能明显改善,氧化应激和焦亡蛋白水平表达下降。2、在体外实验,四组不同处理的细胞中,control组与klotho组细胞活性良好,LDH释放量低,CM组的活性显著下降,LDH的释放增加,CM+klotho组较CM组的细胞活力显著增加,LDH释放下降。control组和klotho组的细胞,SOD活性高,MDA含量低,HK-2细胞的ROS水平较低;CM组较Control组,SOD活性显著降低,MDA含量和ROS水平显著增加;CM+klotho组较CM组中,SOD的活性有所恢复,MDA含量和ROS的水平明显下降。Control组和klotho组的细胞上清液中各种炎症因子含量均处于较低水平;CM组上清液中炎症因子含量较Control组显著增加;CM+klotho组较CM组,各炎症因子含量明显下降。此外,control组和klotho组,IL-18,IL-1β,p-NF-κB,NLRP3,Caspase-1,GSDMD和cleaved-GSDMD表达量较低;CM组较control组,焦亡蛋白显著上调,NF-κB活化明显;CM+klotho组较CM组而言,HK-2细胞内上述蛋白的表达显著降低,NF-κB活化程度较低。结论:1、Klotho能够有效缓解CI-AKI。2、Klotho通过抑制氧化应激、炎症和NF-κB/NLRP3介导的肾小管上皮细胞焦亡达到缓解CI-AKI的发生,为CI-AKI的治疗提供新的见解。
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