人胰岛素基因鸡输卵管特异表达载体的构建及转基因鸡的建立

来源 :莱阳农学院 青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bbcat1982
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
利用转基因动物生产功能性蛋白是目前生命科学领域中的研究热点,与哺乳动物乳腺生物反应器相比,鸡输卵管生物反应器具有明显的优点。胰岛素是胰脏中胰岛β细胞分泌的一种蛋白质激素,是维持血糖在正常水平的主要激素之一,也是治疗I型糖尿病的首选药物。 本实验首先从鸡胸肌中提取基因组DNA,根据已报道的鸡卵清蛋白基因5调控序列设计特异性引物,利用PCR的方法扩增获得了1.2kb DNA片段,克隆到pGEM T-Vector后,经酶切和序列测定证实,此片段即为鸡卵清蛋白基因5调控序列。分析发现,该片段除具有真核启动子结构特征外,还保留了全部组织特异性表达所需的调控元件。 随后将此1.2kb的DNA片段克隆到真核表达载体pVAX1上,替换原有的CMV启动子,再将含有第一内含子的经过改造的人胰岛素基因组基因连接到其下游,经酶切及测序鉴定证明,我们成功地构建了人胰岛素基因输卵管定位表达载体pOV-ImINS。 选取相同日龄海兰褐母鸡8只,通过卵巢注射法将上述输卵管特异性表达载体注射入这些母鸡卵巢中,将其与正常公鸡合笼后,收集每只母鸡所产蛋,对所采集的鸡蛋40枚进行孵化,共获得G1代子鸡21只。用所设计的一对PCR引物P1P2,扩增约800bp的胰岛素基因片段进行检测,结果共有11只为阳性,阳性率为52.3%。为建立人胰岛素转基因鸡生物反应器奠定了基础。
其他文献
采用IPTG诱导法分别对重组菌株BL21(DE3)(pET28a-K88ac-STⅡ)和BL21(DE3)(pTHioHisB-VP4-STI)进行诱导培养。后行SDS-PAGE和Western-blot检测,在表达蛋白鉴定的基础之上,通过
本文通过对商陆种子进行多种温度和多种前处理方法试验,结果以浓硫酸浸泡处理10分种或20分钟破除种子硬实最有效;25℃恒温是破除硬实商陆种子的适宜发芽温度。 In this paper, a var
当前,在全军团级以上领导班子和领导干部中开展的以“讲学习、讲政治、讲正气”为主要内容的党性党风教育正在顺利、健康地发展,不少单位已初见成效。在这种情况下,宣传报道要紧
脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是一种重要的人畜共患病病原,会引起猪和某些哺乳动物、啮齿动物乃至灵长类动物的一种以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要特征
早上闹钟一响,妈妈就打开了灯,催促我该起床了。她在大衣橱里翻了半天,翻出一件毛衣,扔到我的面前说:“今天要下雨,待会儿会降温,加件毛衣吧!”我最讨厌加衣服,穿得像个棉花
我小时候非常淘气,竟然达到“人人畏惧如恶灵”之地步。母亲刚把化妆盒合上离开,我就蹿过去,将里面的口红按碎,然后随处涂鸦;在幼儿园不抢到最好的玩具绝不罢手;院子里的秋千
本实验以分属特早熟、中熟和晚熟三类不同抗冷级别的9个棉花品种为材料,将其幼苗经4℃低温处理15小时,测定POD活性,并与未经冷冻处理的相应测定值进行分析比较。结果表明:(1)未经冷冻处理的
猪传染性胃肠炎(TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床特征的高度接触性传染病。现已成为猪的一种世界性疾病,给养猪业造成极大危害。在TGEV
1984~1986年在吉林省爱林参场白浆型参地土壤上分期采集参株进行测定。结果表明,四~六龄参株各器官三要素积累与分配的动态以及地上部分和地下部分三要素消长的联系和差异,形成1公斤六龄参
腺病毒载体是继逆转录病毒载体后在基因治疗、基因免疫等方面应用开发得较早且较成熟的一种基因载体。与逆转录病毒载体相比,腺病毒载体能高效地把外源基因转运到各种靶细胞和