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目的：结核性脑膜炎（Tuberculous meningitis，TBM）简称结脑，是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）感染蛛网膜下腔引起的脑膜、脊髓膜的一种非化脓性炎症性疾病。TBM的死亡率和致残率很高，是结核病中最严重的一种类型，快速有效的诊断和早期治疗是减少病死率和致残率的关键。结脑的早期、准确的诊断一直是一个世界性难题，找到MTB存在于蛛网膜下腔的证据是诊断结脑的关键，利用免疫学方法检测脑脊液中的MTB特异性抗原可以证明MTB的存在。结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6（6kD early secretory antigenic target，ESAT-6）和滤液培养蛋白10（culture filtrate protein10，CFP-10）是MTB的两种特异性抗原，被认为是结脑诊断最有希望的两种抗原。本实验将应用ELISA和免疫细胞化学染色法对TBM患者脑脊液中的ESAT-6和CFP-10进行定量定性分析以及细胞定位研究，以期为TBM的临床诊断和实验室研究提供依据。方法：收集临床怀疑为TBM患者的病历资料，根据最新诊断标准进行评分，筛选出30例“确诊TBM”和“很可能TBM”为病例组（结脑组），20例非结核性脑膜炎患者（非结脑组）为对照组。结脑组所有患者抗痨治疗前、治疗1~2周后，非结脑患者入院后分别行腰椎穿刺术，留取脑脊液。对结脑组以及非结脑组（共80份）脑脊液的全部常规、生化检查结果进行记录并分析。应用ELISA双抗体夹心法分别检测80份脑脊液中ESAT-6及CFP-10抗原，对抗原浓度进行分析。用离心沉淀法收集结脑组和非结脑组首次腰穿的脑脊液细胞于玻片上，用免疫细胞化学染色法检测脑脊液细胞内的两种抗原，记录并分析结果。结果：1临床资料分析结果：符合入组标准的TBM患者30例，确诊TBM5例，很可能TBM25例，其中男性16例，女性14例，年龄8个月～60岁，平均为34.39±2.76岁。对照组为其他神经系统疾病，共20例，男12例，女8例，年龄4～67岁，平均为30.64±4.27岁。结脑组与正常组相比，脑脊液压力、脑脊液中的总细胞数、白细胞数、蛋白含量均升高，葡萄糖、氯化物含量降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结脑组治疗前后脑脊液常规生化分析比较，脑脊液压力、总细胞数、白细胞数、蛋白含量均有所降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）；而葡萄糖、氯化物含量差异均无统计学意义（P＞0.05）。2脑脊液中ESAT-6抗原测定：结脑组60份脑脊液，经ELISA法检测，ESAT-6水平为（26.38～39.68）pg/ml，含量平均值为33.03±3.32pg/ml；对照组中ESAT-6水平为（0.00～1.47） pg/ml，含量平均值为0.05±0.87pg/ml，与0比较差异无统计学意义（P＞0.05）。实验组与对照组比较有明显差异（P＜0.05）。结脑组患者治疗前脑脊液中ESAT-6水平为（33.37～53.42）pg/ml，平均值为43.40±4.90pg/ml，治疗1~2周后脑脊液中ESAT-6水平为（15.14～30.18）pg/ml，平均值为22.66±3.68pg/ml，前后比较差异有统计学意义（P＜0.05）。3脑脊液中CFP-10抗原测定：结脑组脑脊液中CFP-10水平为（181.18～244.67）pg/ml，含量平均值为212.93±15.86pg/ml；对照组CFP-10水平为（7.59～35.99）pg/ml，含量平均值为9.73±32.63pg/ml，二者比较有明显差异（P＜0.05）。治疗前脑脊液中CFP-10水平为（204.61～300.68）pg/ml平均值为252.64±23.49pg/ml，治疗1~2周后脑脊液中CFP-10水平为（134.21～212.22）pg/ml，平均值为173.21±19.07pg/ml，前后比较差异有统计学意义（P＜0.05）。4脑脊液细胞内ESAT-6和CFP-10抗原的检测：结脑组30例，经ESAT-6免疫细胞化学染色有22例阳性，对照组20例中有2例阳性。敏感性为73.33%，特异性为90.00%；CFP-10免疫细胞化学染色结脑组有26例阳性，对照组中有1例阳性，敏感性为86.67%，特异性为95.00%。5ESAT-6及CFP-10抗原联合检测的比较：利用上述4中结果，将检测两种抗原的敏感性和特异性分别进行X2检验，敏感性P＜0.05，差异有统计学意义；特异性P＞0.05，差异无统计学意义。因此，两种方法联合检测的敏感性大于单一抗原的检测。结论：ESAT-6与CFP-10抗原是MTB特异性抗原，存在于TBM患者的脑脊液中，而其它非结脑患者脑脊液中几乎不存在。发病早期即可以检测到，抗原含量随病情好转而减少，为结脑的早期诊断、判断病情提供了依据。动态观察其含量变化对TBM患者的病情监测具有重要意义。这两种结核抗原存在于脑脊液单核细胞内，可用免疫细胞化学染色法对其进行定性诊断，其敏感性、特异性与前人报道相吻合。联合检测两种抗原较检测单一抗原更敏感。