【摘 要】
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目的观察当肝癌细胞的DNA损伤时三结构域蛋白28(Trim28)磷酸化对其生存能力的影响。方法将Hep G2细胞常规复苏、培养、传代后分为SB203580+UV组及UV组、对照组。UV组用紫外线
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目的观察当肝癌细胞的DNA损伤时三结构域蛋白28(Trim28)磷酸化对其生存能力的影响。方法将Hep G2细胞常规复苏、培养、传代后分为SB203580+UV组及UV组、对照组。UV组用紫外线(UV)照射Hep G2细胞建立Hep G2细胞DNA损伤的模型,SB203580+UV组在紫外线照射的基础上使用Trim28磷酸化抑制剂4-(4-氟苯基)-2-(4-甲基亚磺3酰基苯基)-5-4(-吡啶基)-1H-咪唑(SB203580)处理细胞,对照组不作处理。通过免疫印迹实验(westernblot)检测上各组细胞的Trim28、磷酸化Trim28 ser473(P-Trim28ser473)、γ-H2AX的表达;通过免疫荧光实验(immunofluorescence)观察不同处理条件下γ-H2AX的表达及在细胞内分布情况;通过噻唑蓝(MTT)实验观察上述处理后Hep G2细胞的生存能力。结果免疫印迹实验:紫外线照射Hep G2细胞后2h、12h、24h以及对照组P-Trim28 ser473的表达量分别为(0.66±0.13、0.27±0.25、0.12±0.27、0.12±0.46),2h组与其余各组差异具有统计学意义(t=5.246P<0.05、t=7.143 P<0.05、t=6.920 P<0.05);紫外线照射细胞后2h SB203580+UV(0.96±0.16)组与UV组(0.94±0.13)、对照组(1.03±0.12)的Trim28表达无统计学差异(t=1.596 t=1.346 t=-0.190,P>0.05);紫外线照射细胞后2h SB203580+UV组P-Trim28(0.32±0.04)明显低于UV组(0.72±0.05),差异具有统计学意义(t=8.500,P<0.05);紫外线照射Hep G2细胞2h后SB203580+UV组(2.61±0.27)与UV组(2.51±0.09)的γ-H2AX表达均高于无照射对照组(0.89±0.05),但两组间无明显差异(t=-0.593,P>0.05)。免疫荧光实验:紫外线照射Hep G2细胞2h后UV组与SB203580+UV组的γ-H2AX均趋向细胞核聚集,荧光强阳性细胞比例分别为(82%±14%、84%±16%),无显著性差异(t=-0.254 P>0.05),24h UV及SB203580+UV组荧光强阳性细胞比例分别为(15%±15%、62%±12%),差异具有统计学意义(t=-4.745 P<0.05)。噻唑蓝(MTT)实验:SB203580组(只使用SB203580处理细胞)24、48、72小时细胞OD值为(0.34±0.04、0.43±0.04、0.59±0.06)与对照组OD值(0.33±0.04、0.41±0.04、0.64±0.03)相比差异无统计学意义(t=-0.410 P>0.05,t=-0.373 P>0.05,t=1.520 P>0.05);紫外线照射后24、48、72小时UV组细胞生存率(0.95±0.07、0.62±0.10、0.35±0.06)明显高于SB203580+UV组(0.85±0.07、0.37±0.04、0.20±0.03),差异具有统计学意义(t=-2.326、-5.212、-4.577,P<0.05)。结论当肝癌细胞Hep G2的DNA受损伤时会导致三结构域蛋白ser473(Trim28 ser473)磷酸化。损伤DNA后抑制三结构域蛋白28 ser473(Trim28ser473)磷酸化可能会延缓DNA的修复,并降低肝癌细胞Hep G2的生存率。
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