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支原体(Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁的最小原核细胞型微生物,它结构简单,大小介于病毒和细菌之间。自1956年第一次检测到细胞培养物中存在支原体污染以来,支原体污染细胞培养物这个世界性问题持续了半个多世纪,兽用活疫苗中存在支原体污染的事例同样屡见不鲜,严重影响了疫苗的纯净性,降低疫苗的质量进而引发支原体感染,给畜牧业及疫苗生产企业带来巨大的经济损失。为了预防及控制支原体污染,减少支原体污染带来的危害,各种检测技术被应用到支原体污染的检测领域中,各国相继建立了支原体的检测方法。我国对支原体污染的研究工作起步较晚,支原体污染的检测技术有待改进。为了完善生物制品中支原体污染的检测技术,本研究针对口腔支原体(Ora)、精氨酸支原体(Arg)、发酵支原体(Fer)、莱氏无胆甾原体(Ala)、猪鼻支原体(Mho)、猪肺炎支原体(Mhp)、鸡毒支原体(Mg)、牛支原体(Mbo)、衣阿华支原体(Mi)、滑液支原体(Ms)、絮状支原体(Mf)、火鸡支原体(Mm)、鸡支原体(Gal)、鸭支原体(Ma),共计14种污染生物制品的常见支原体设计引物,建立PCR检测方法,并应用此方法对多种生物制品进行检测。主要试验结果如下：1.生物制品中支原体污染的PCR检测方法的建立对14种支原体标准株的基因组序列进行分析,自行设计出一对可以检测这14种支原体的通用引物,同时培养这14种支原体,获取DNA模板,进行PCR扩增反应。结果显示14个模板均有目的片段,且片段大小在440bp-467bp之间,以此建立生物制品中支原体污染的PCR检测方法,扩大污染生物制品的支原体检测范围。2.生物制品中支原体污染的PCR检测方法的敏感性及特异性试验使用颜色变化单位法(CCU法)检测出8种支原体培养物的浓度后,对已建立的PCR检测方法进行敏感性试验。结果显示,此方法可以检测到8种支原体的最小浓度在1CCU～10CCU之间；在特异性试验中,选取各类细菌及病毒14种作对照,结果14种对照均不发生扩增反应。试验结果说明此PCR检测方法敏感性良好,特异性强。3.生物制品中支原体污染的PCR检测方法的应用应用此方法对10种兽用活疫苗中71个批次的样品和11种细胞系的24份传代细胞样品进行支原体污染检测,结果有3份疫苗样品为阳性、6份细胞样品为阳性。在对比其他支原体污染的检测方法中,已建立的PCR检测方法与培养法、DNA荧光染色法的检测结果均相同,但商品化支原体PCR检测试剂盒主要针对污染细胞的5种支原体有扩增反应,其检测结果是2份疫苗样品为阳性、6份细胞样品为阳性,产生漏检现象。试验结果说明此PCR检测方法的检测结果准确性高,避免出现漏检现象,有较好的应用前景。