论文部分内容阅读
子宫内膜异位症（Endomemosis，内异症）是一种主要发生于生育期妇女的常见妇科疾病，患者常见症状为下腹痛、痛经、性交不适和不孕。严重的盆腔痛和不孕已经给现代妇女身心健康带了严重的危害。该病的发病率近年有明显增高趋势，其发病率约为7％-15％，在不孕患者中，30％-50％有内异症存在。目前确切病因尚不清楚，经典的病因学说有内膜种植学说、体腔上皮化生学说、诱导学说。内异症虽是一种良性疾病，却表现出与恶性肿瘤相似的一些生物学特征，病理表现为细胞增生、侵润、转移及复发。目前已从分子水平揭示了癌症和子宫内膜异位症之间的相似性。肿瘤细胞的主要特征是增生和恶性转化，而细胞的增生和恶性转化都是控制细胞分裂（即细胞周期）异常引起的结果。
细胞周期蛋白A（CyclinA）是细胞周期G1/S及G2/M期重要调控因子，是DNA复制及细胞有丝分裂的重要双重调控点，在肿瘤细胞增生和恶性转化行为中起了重要作用。P21WAF1/CIP1（简称P21）是一种广谱负性调节因子，可通过与CyclinA-CDK2结合使CyclinA-CDK2复合物的激酶活性丧失，从而抑制细胞的增殖。目前已经在多种肿瘤组织中发现有CyclinA及P21的表达异常，认为CyclinA在肿瘤组织中异常高表达及P21低表达与肿瘤细胞增殖密切相关。近年来研究者开始从肿瘤发生的角度对内异症进行病因及发病机制研究。目前国内外研究者对于一些控制G1/S及G2/M2期转化的细胞周期蛋白与子宫内膜异位症的关系已经有了一些初步研究，比如CyclinD1、B等，然而在G1/S及G2/M控制点上同时起作用的CyclinA研究甚少。Zhang H等采用蛋白质组学技术发现子宫内膜异位症患者异位内膜组织中类似CyclinA蛋白点高表达峰，由此我们推测内异症的发病可能与CyclinA及P21异常表达导致细胞不正常生长，增殖活性改变有关。
目的：
本课题选择CyclinA及P21作为检测指标，从基因及蛋白质方面观察两者在异位内膜组、在位内膜组及对照组中表达是否存在差异，进而探讨CyclinA和P21在内异症发生发展中作用及临床意义，从而有可能为揭示内异症的病因、发病机制及探索新的治疗方法提供新的理论依据。
方法：
1.随机选择重庆医科大学附属第一医院妇产科2008年5月至2009年1月住院行开腹或者腹腔镜手术治疗的内异症患者在位内膜（在位内膜组，25例）和异位子宫内膜（异位内膜组，28例）以及因输卵管积水，输卵管粘连住院手术患者的子宫内膜（对照组，35例）。
2.采用SABC免疫组化方法检测异位内膜组、在位内膜组及对照组中CyclinA和P21蛋白在子宫内膜上皮细胞及间质细胞阳性表达率及阳性表达位置。
3.采用免疫印迹方法了解异位内膜组、在位内膜组及对照组中CyclinA和P21蛋白的表达差异性及临床意义。
4.采用RT-PCR方法了解CyclinA和P21mRNA在异位内膜组、在位内膜组及对照组中表达差异性及临床意义。
结果：
1.免疫组化技术检测CyclinA蛋白阳性表达主要位于子宫内膜腺细胞及间质细胞胞核中，在异位内膜组阳性表达率（82.1％）均明显高于在位内膜组（36.0％）及对照组（14.3％）（P<0.05）；免疫组化技术检测P21蛋白阳性表达主要位于子宫内膜腺细胞及间质细胞胞核中，在对照组中阳性表达率（47.6％）和在位内膜组阳性表达率（23.1％）均明显高于异位内膜组（10.7％）（P<0.05）。
2.免疫印迹技术检测 CyclinA蛋白在异位内膜增生期与分泌期表达量（0.95±0.10，0.91±0.18）均明显高于在位内膜（0.53±0.08，0.27±0.11）及对照组（0.47±0.11，0.22±0.09）（P<0.05）；在位内膜CyclinA表达量与对照组相比无显著性差异（P>0.05）；P21蛋白在对照组内膜增生期与分泌期表达量（0.74±0.13，1.23±0.15）均明显高于在位内膜（0.59±0.21，0.62±0.29）及异位内膜（0.40±0.36，0.43±0.33）（P<0.05）。3.RT-PCR技术检测CyclinA mRNA在异位内膜增生期与分泌期表达量（1.24±0.10，1.33±0.21）均明显高于在位内膜（0.72±0.26，0.42±0.22）及对照组（0.68±0.09，0.35±0.06）（P<0.05）；P21 mRNA在对照组内膜增生期与分泌期表达量（0.21±0.01，0.54±0.35）均明显高于在位内膜（0.09±0.06，0.28±0.02）及异位内膜（0.06±0.01，0.13±0.00）（P<0.05）；
4.CyclinA在对照组内膜增生期表达量高于分泌期（P<0.05）；P21在对照组内膜分泌期表达量高于增生期（P<0.05）；两者在异位内膜表达均失去周期性（P>0.05）。
5.CyclinA与P21在异位内膜中表达呈负相关（r=0.738，P<0.01）。
结论：
1.CyclinA及P21是两种重要的细胞周期调节蛋白，与对照组及在位内膜组比较，CyclinA蛋白及基因在异位内膜中表达量均明显增高，高于在位内膜及对照组内膜。P21蛋白及基因表达量均较对照组及在位内膜降低。以上研究结果表明CyclinA及P21异常表达可能在内异位症的异位内膜细胞增殖中起着重要作用，其机制可能为CyclinA不断与CDK2结合形成复合物促进细胞由S期进入G2期及G2期进入M期，同时低表达的P21降低了对CyclinA-CDK2等激酶复合物活性的抑制，从而使细胞不断增殖。这一研究结果为我们在细胞增殖方面研究内异症提供了新的理论依据，为我们今后研究从分子靶向方面来治疗子宫内膜异位提供了又一个新的靶点。
2.CyclinA和P21在异位内膜组中表达呈负相关，说明两者具有反向协同作用，表明单一的CyclinA高表达或者P21低表达，可能不足以导致内异症的发生，而需要两者协同或者其他更多基因的共同作用。
3.CyclinA在对照组子宫内膜增生期表达明显高于分泌期，P21在对照组子宫内膜表达增生期表达低于分泌期，而两者在异位内膜组中表达均失去周期性，CyclinA呈持续性高表达，P21则呈持续性低表达。我们推测CyclinA及P21在调节子宫内膜细胞的生长时可能依赖体内雌孕激素作用。这一研究结果进一步从增殖通路证实子宫内膜异位症是一种激素依赖性疾病，为我们进一步研究内分泌治疗内异症提供了新的理论依据及靶点。
细胞周期蛋白A（CyclinA）是细胞周期G1/S及G2/M期重要调控因子，是DNA复制及细胞有丝分裂的重要双重调控点，在肿瘤细胞增生和恶性转化行为中起了重要作用。P21WAF1/CIP1（简称P21）是一种广谱负性调节因子，可通过与CyclinA-CDK2结合使CyclinA-CDK2复合物的激酶活性丧失，从而抑制细胞的增殖。目前已经在多种肿瘤组织中发现有CyclinA及P21的表达异常，认为CyclinA在肿瘤组织中异常高表达及P21低表达与肿瘤细胞增殖密切相关。近年来研究者开始从肿瘤发生的角度对内异症进行病因及发病机制研究。目前国内外研究者对于一些控制G1/S及G2/M2期转化的细胞周期蛋白与子宫内膜异位症的关系已经有了一些初步研究，比如CyclinD1、B等，然而在G1/S及G2/M控制点上同时起作用的CyclinA研究甚少。Zhang H等采用蛋白质组学技术发现子宫内膜异位症患者异位内膜组织中类似CyclinA蛋白点高表达峰，由此我们推测内异症的发病可能与CyclinA及P21异常表达导致细胞不正常生长，增殖活性改变有关。
目的：
本课题选择CyclinA及P21作为检测指标，从基因及蛋白质方面观察两者在异位内膜组、在位内膜组及对照组中表达是否存在差异，进而探讨CyclinA和P21在内异症发生发展中作用及临床意义，从而有可能为揭示内异症的病因、发病机制及探索新的治疗方法提供新的理论依据。
方法：
1.随机选择重庆医科大学附属第一医院妇产科2008年5月至2009年1月住院行开腹或者腹腔镜手术治疗的内异症患者在位内膜（在位内膜组，25例）和异位子宫内膜（异位内膜组，28例）以及因输卵管积水，输卵管粘连住院手术患者的子宫内膜（对照组，35例）。
2.采用SABC免疫组化方法检测异位内膜组、在位内膜组及对照组中CyclinA和P21蛋白在子宫内膜上皮细胞及间质细胞阳性表达率及阳性表达位置。
3.采用免疫印迹方法了解异位内膜组、在位内膜组及对照组中CyclinA和P21蛋白的表达差异性及临床意义。
4.采用RT-PCR方法了解CyclinA和P21mRNA在异位内膜组、在位内膜组及对照组中表达差异性及临床意义。
结果：
1.免疫组化技术检测CyclinA蛋白阳性表达主要位于子宫内膜腺细胞及间质细胞胞核中，在异位内膜组阳性表达率（82.1％）均明显高于在位内膜组（36.0％）及对照组（14.3％）（P<0.05）；免疫组化技术检测P21蛋白阳性表达主要位于子宫内膜腺细胞及间质细胞胞核中，在对照组中阳性表达率（47.6％）和在位内膜组阳性表达率（23.1％）均明显高于异位内膜组（10.7％）（P<0.05）。
2.免疫印迹技术检测 CyclinA蛋白在异位内膜增生期与分泌期表达量（0.95±0.10，0.91±0.18）均明显高于在位内膜（0.53±0.08，0.27±0.11）及对照组（0.47±0.11，0.22±0.09）（P<0.05）；在位内膜CyclinA表达量与对照组相比无显著性差异（P>0.05）；P21蛋白在对照组内膜增生期与分泌期表达量（0.74±0.13，1.23±0.15）均明显高于在位内膜（0.59±0.21，0.62±0.29）及异位内膜（0.40±0.36，0.43±0.33）（P<0.05）。3.RT-PCR技术检测CyclinA mRNA在异位内膜增生期与分泌期表达量（1.24±0.10，1.33±0.21）均明显高于在位内膜（0.72±0.26，0.42±0.22）及对照组（0.68±0.09，0.35±0.06）（P<0.05）；P21 mRNA在对照组内膜增生期与分泌期表达量（0.21±0.01，0.54±0.35）均明显高于在位内膜（0.09±0.06，0.28±0.02）及异位内膜（0.06±0.01，0.13±0.00）（P<0.05）；
4.CyclinA在对照组内膜增生期表达量高于分泌期（P<0.05）；P21在对照组内膜分泌期表达量高于增生期（P<0.05）；两者在异位内膜表达均失去周期性（P>0.05）。
5.CyclinA与P21在异位内膜中表达呈负相关（r=0.738，P<0.01）。
结论：
1.CyclinA及P21是两种重要的细胞周期调节蛋白，与对照组及在位内膜组比较，CyclinA蛋白及基因在异位内膜中表达量均明显增高，高于在位内膜及对照组内膜。P21蛋白及基因表达量均较对照组及在位内膜降低。以上研究结果表明CyclinA及P21异常表达可能在内异位症的异位内膜细胞增殖中起着重要作用，其机制可能为CyclinA不断与CDK2结合形成复合物促进细胞由S期进入G2期及G2期进入M期，同时低表达的P21降低了对CyclinA-CDK2等激酶复合物活性的抑制，从而使细胞不断增殖。这一研究结果为我们在细胞增殖方面研究内异症提供了新的理论依据，为我们今后研究从分子靶向方面来治疗子宫内膜异位提供了又一个新的靶点。
2.CyclinA和P21在异位内膜组中表达呈负相关，说明两者具有反向协同作用，表明单一的CyclinA高表达或者P21低表达，可能不足以导致内异症的发生，而需要两者协同或者其他更多基因的共同作用。
3.CyclinA在对照组子宫内膜增生期表达明显高于分泌期，P21在对照组子宫内膜表达增生期表达低于分泌期，而两者在异位内膜组中表达均失去周期性，CyclinA呈持续性高表达，P21则呈持续性低表达。我们推测CyclinA及P21在调节子宫内膜细胞的生长时可能依赖体内雌孕激素作用。这一研究结果进一步从增殖通路证实子宫内膜异位症是一种激素依赖性疾病，为我们进一步研究内分泌治疗内异症提供了新的理论依据及靶点。