【摘 要】
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目的:随着人口老龄化加剧,中枢神经系统（CNS）疾病发生率日益增加,其中脊髓损伤（SCI）主要是由各种外力所导致的脊髓挫伤,从而引起神经功能永久性障碍甚至瘫痪,这对患者以及社会都造成了巨大的打击。SCI后星形胶质细胞（astrocytes,AS）激活成为反应性星形胶质细胞,它的出现可以使受损组织得到修复以及促进运动功能的恢复,然而它们最终会变成瘢痕性星形胶质细胞并形成致密的胶质瘢痕,虽然它也能一定
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目的:随着人口老龄化加剧,中枢神经系统（CNS）疾病发生率日益增加,其中脊髓损伤（SCI）主要是由各种外力所导致的脊髓挫伤,从而引起神经功能永久性障碍甚至瘫痪,这对患者以及社会都造成了巨大的打击。SCI后星形胶质细胞（astrocytes,AS）激活成为反应性星形胶质细胞,它的出现可以使受损组织得到修复以及促进运动功能的恢复,然而它们最终会变成瘢痕性星形胶质细胞并形成致密的胶质瘢痕,虽然它也能一定程度抑制急性炎症的扩散,但是在炎症消退后,反应性星形胶质细胞形成的胶质瘢痕可以作为物理和化学屏障,阻碍轴突再生、神经连接和轴突的生长,对脊髓神经功能的恢复有不利影响。目前SCI后如何抑制星形胶质细胞的过度增生以及如何补充缺失的神经元仍然是个难题。间充质干细胞（MSCs）及其细胞外囊泡（EVs）的研究结果显示,EVs具有易获得及储存、不受血脑屏障的影响、天然的分子传输载体等优点。故本课题意图探索EMSCEVs能否诱导星形胶质细胞转分化为神经元,为神经元的缺失给予补充从而帮助SCI后神经运动感觉功能的恢复。方法:（1）采用组织块直接培养法培养SD大鼠EMSC（来源于鼻黏膜）,并且根据其形态以及免疫荧光染色进行鉴定,收集细胞上清液以提取细胞外囊泡,通过粒径分析、透射电镜及蛋白免疫印迹予以鉴定;（2）采用胰酶消化法培养SD大鼠大脑星形胶质细胞,并予以鉴定;（3）星形胶质细胞分2组干预:分别加入外胚层间充质干细胞来源细胞外囊泡（质量浓度为1 g/L,2 m L培养基内加入细胞外囊泡体积为66μL）和同体积的PBS干预星形胶质细胞72 h;（4）通过免疫荧光、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹来检测神经元标志物神经元特异性烯醇化酶及神经丝蛋白200的表达量。结果:（1）外胚层间充质干细胞形态呈典型梭形并且高表达间充质干细胞标志蛋白CD44、Nestin和Vimentin;外胚层间充质干细胞来源细胞外囊泡呈经典茶托样形态,粒径分布在30-200 nm之间,蛋白免疫印迹显示细胞外囊泡标志蛋白CD9,CD63及TSG101呈现阳性表达;（2）星形胶质细胞形态呈不规则星状且高表达胶质纤维酸性蛋白;（3）与对照组相比,外胚层间充质干细胞来源细胞外囊泡组可见较多神经元样细胞,胞体呈梭形且饱满,突起增多变长,并且高表达神经元特异性烯醇化酶及神经丝蛋白200（P＜0.05）;结论:实验表明,EMSC-EVs能够诱导星形胶质细胞向神经元转分化,在中枢神经系统损伤后给予补充缺失的神经元,促进其功能的恢复。
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