应用静电纺丝技术制备PLCL/ECM复合神经导管及其体内外评价

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:youyou306
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目的:应用静电纺丝技术制备含有脱细胞基质(Extracellular matrix,ECM)的聚乳酸-聚己内酯(PLCL)神经修复导管,并初步评价其功能。方法:通过静电纺丝技术制备出两种神经导管,即把10%PLCL溶液进行静电纺丝所成的聚乳酸-聚己内酯(PLCL)导管,及在10%PLCL溶液中加入ECM,再进行静电纺丝所成的PLCL/ECM导管。并进行扫描电镜观察、切片染色观察、力学性能检测、细胞毒性检测及细胞相容性检测。之后选取成年雄性Wistar大鼠54只,将坐骨神经切断,用不同材料桥接,神经远近端间隙距离8mm。根据移植材料不同,动物实验分为三组。A组:PLCL/ECM导管组;B组:PLCL导管组;C组:大鼠自体神经移植组。并在术后4周、8周和12周检测行为学(SFI)、神经传导速度(NCV)、小腿中端周长、甲苯胺蓝染色,并分析评价坐骨神经再生效果。结果:把PLCL/ECM导管切片经考马斯亮蓝染色后在显微镜下可见PLCL材料中分布着均匀的ECM。两种导管的缝合线力学拉伸结果可以看出,PLCL/ECM导管的弹性模量值大于PLCL导管的弹性模量值(p<0.05),但PLCL/ECM导管的屈服应力与PLCL导管的屈服应力相差不大(p>0.05),这说明ECM的加入,对神经导管的缝合线力学拉伸效果并无太大影响。细胞毒性试验结果显示,不同培养时间下,PLCL和PLCL/ECM各浓度组的OD450均显著高于阳性对照组OD450,且与阴性对照组OD450相差不大,通过计算各组细胞存活率可以发现,不同浸提液浓度都是在24h时PLCL/ECM与PLCL组的细胞存活率并无太大差异(p>0.05),但在培养48、72、96h时后,PLCL/ECM组细胞存活率都高于PLCL组细胞存活率(p<0.05)。在扫描电镜下对比两组细胞黏附情况,可以看出PLCL/ECM组的细胞黏附情况要好于PLCL组,这说明PLCL/ECM组更优于细胞生长。术后无大鼠死亡或切口感染,也没有出现明显排异反应及与手术相关的其它并发症。移植手术后,随着时间推移,A组、B组、C组的各方面功能都在逐步恢复,C组恢复较快,A组、B组恢复较慢。术后4周指标:4周时行为学和小腿中端周长实验结果在三组间无较大差异,但C组的NCV显著好于另外两组(p<0.05),且髓鞘轴突数量也显著多于另外两组(p<0.05)。术后8周指标:(1)坐骨神经指数:C组优于A组和B组(p<0.05),A组与B组差异不大(p>0.05);(2)电生理检测:C组NCV好于A组,但没有显著性差异(p>0.05),C组NCV高于B组(p<0.05),A组NCV高于B组,但没有显著性差异(p>0.05);(3)小腿中端周长检测:C组小腿肌肉恢复力均优于A组与B组(p<0.05),但A组与B组之间差异无统计学意义(p>0.05);(4)甲苯胺蓝染色:与4周相比,8周各组的髓鞘碎片减少,有髓鞘轴突数目显著增多。C组再生的有髓鞘轴突数目明显多于A组与B组(p<0.05);A组的髓鞘轴突数目显著增多且多于B组(p<0.05)。术后12周指标:(1)坐骨神经指数:C组虽然仍优于A组(p<0.05)但与8周相比差异变小,A组优于B组(p<0.05);(2)电生理检测:A、B两组NCV均较8周时明显提高(p<0.05),A组NCV虽然仍小于C组(p<0.05)但与8周相比差异变小,B组与A组有较大差异(p<0.05);(3)小腿中端周长检测:各组较8周相比肌肉恢复率都有提高,C组肌肉恢复率高于B组(p<0.05)与A组差异不大(p>0.05),A组和B组之间仍无显著差异(p>0.05);(4)甲苯胺蓝染色:与8周相比,12周各组的髓鞘碎片基本不见,A组的髓鞘轴突数目明显增多且优于B组(p<0.05),并与C组相当(p>0.05)。结论:脱细胞基质的加入不仅提高了神经导管的生物相容性,对于坐骨神经的修复也具有一定的促进作用。
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