【摘 要】
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目的： 研究青蒿琥酯对铜绿假单胞菌生物膜形成及结构的影响，并对其机制进行初步探讨。 方法： 选取铜绿假单胞菌野生株PAO1，分光光度法测定青蒿琥酯对铜绿假单胞菌浮游菌
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目的： 研究青蒿琥酯对铜绿假单胞菌生物膜形成及结构的影响，并对其机制进行初步探讨。 方法： 选取铜绿假单胞菌野生株PAO1，分光光度法测定青蒿琥酯对铜绿假单胞菌浮游菌生长的影响。结晶紫染色后测定570nm波长光密度值，以观察24h时细菌生物膜量。采用体外静态模型培养3天获得成熟生物膜，经不同浓度的青蒿琥酯处理后利用平板稀释计数法计算活菌数。利用激光扫描共聚焦显微镜成像技术(CLSM)结合生物膜定量分析软件 COMSTAT对生物膜的单位面积生物量、平均厚度、粗糙系数、平均扩散距离进行定量分析。利用平板稀释计数法观察青蒿琥酯联合亚抑菌浓度（1/2MIC,1/4MIC）的环丙沙星对生物膜内的活菌数量的影响，以观察二者是否有协同作用。另外通过颤搐运动实验检测青蒿琥酯对铜绿假单胞菌颤搐运动距离的影响，Ferrozine法检测青蒿琥酯对铜绿假单胞菌生物膜中 Fe(Ⅱ)的影响。最后观察青蒿琥酯联合Fe(Ⅱ)对铜绿假单胞菌生物膜内活菌数及结构的影响。 结果： 青蒿琥酯对铜绿假单胞菌浮游菌无明显抑制作用。建模3d后，生物膜经不同浓度的青蒿琥酯干预12h后，512μg/mL、1024μg/mL组生物膜内的活菌数与对照组相比，差异有统计学意义(p＜0.05)。同样，青蒿琥酯512μg/mL、1024μg/mL组在24h时生物膜量显著下降，与对照组相比有统计学差异。与对照组相比，经青蒿琥酯512μg/mL、1024μg/mL组处理后生物膜生物量、平均厚度以及平均扩散距离等结构指标数值都有明显减少(p＜0.05)，但粗糙系数增加(p＜0.05)。青蒿琥酯与亚抑菌浓度的环丙沙星没有协同作用。另外，与对照组相比，青蒿琥酯组铜绿假单胞菌的颤搐运动距离增加，生物膜中 Fe(Ⅱ)的含量降低。与青蒿琥酯组比，青蒿琥酯联合 Fe(Ⅱ)能够增加生物膜内活菌数(p＜0.05)，但较对照组是降低的(p＜0.05)。COMSTAT软件分析结果示与青蒿琥酯组相比，青蒿琥酯联合 Fe(Ⅱ)组生物膜生物量、平均厚度以及平均扩散距离等结构指标数值都有明显增加(p＜0.05)，粗糙系数降低(p＜0.05)，但与对照组相比无统计学差异。 结论： 青蒿琥酯能够刺激铜绿假单胞菌的颤搐运动，干预铜绿假单胞菌生物膜的形成；而且可能通过降低生物膜中 Fe(Ⅱ)，减少生物膜内活菌数，破坏成熟生物膜的结构。
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