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目的: 在局部组织中,脂肪间充质干细胞(ADMSC)不仅因其干性具有组织再生功能,而且还具备促进创伤愈合,调节免疫的功能。而巨噬细胞的M2a及M2b/c型同样具有这样的功能。研究ADMSC对巨噬细胞活化方向的影响,可以了解ADMSC是否通过影响巨噬细胞来实现其在局部治疗中的功能,完善ADMSC移植治疗的机制研究,并为扩大ADMSC移植治疗的应用范围奠定理论基础。 方法: 提取C57BL/6小鼠的ADMSC及腹腔巨噬细胞,利用流式细胞仪鉴定这两种细胞。收集培养过第2代ADMSC24小时的培养液(ADMSC CM)用以诱导巨噬细胞。以未活化的巨噬细胞作为对照组;利用脂多糖(LPS)模拟局部炎症,诱导巨噬细胞24小时,使其活化为促炎的M1型巨噬细胞;同时利用IL-4、IL-13诱导巨噬细胞24小时,使其活化为M2型巨噬细胞。使用ADMSC CM分别诱导上述两种巨噬细胞,以及未活化的巨噬细胞48小时。观察各组巨噬细胞的形态变化,提取各组细胞的mRNA,总蛋白。利用流式细胞仪,实时荧光PCR,蛋白质印迹,免疫荧光等方法检测各型巨噬细胞的分类指标以确定其在ADMSCCM诱导后的活化方向。检测STAT3,STAT6,以及JNK通路的部分蛋白表达,以明确ADMSC CM影响巨噬细胞活化方向的具体机制。使用CCK-8检测巨噬细胞的活力。 结果: 巨噬细胞在经过ADMSC诱导后,细胞转为梭形,并出现细胞凸起,符合M2型巨噬细胞的形态学特点。未活化的巨噬细胞及M1型巨噬细胞向M2b/c型巨噬细胞转化。其M1型标志(iNOS,IL-12,CD197,P<0.05)表达降低,M2a型标志(IL-27,IGF-1,P<0.05)表达降低,M2b/c型标志(IL-10,SPHK-1,P<0.05)表达升高。而对于IL-4及IL-13诱导出的M2型巨噬细胞,ADMSC似乎并未改变巨噬细胞的活化类型。在这一过程中,STAT3及其下游的SOCS3,STAT6及其下游的IRF4被激活,JNK通路被抑制(P<0.05)。此外,巨噬细胞在被ADMSC诱导后,其细胞活力明显增加。 结论: ADMSC分泌的可溶性细胞因子,可将未活化的巨噬细胞及M1型的巨噬细胞诱导为调节型(M2b/c)巨噬细胞。STAT3,STAT6及JNK通路涉及这一改变。和IL-4及IL-13诱导的M2型巨噬细胞不同,ADMSC诱导的巨噬细胞并不降低Bax的表达,而是提高巨噬细胞的细胞活力。这一结果提示ADMSC对巨噬细胞活化方向的影响是ADMSC在局部组织中起到免疫调节功能可能的机制之一。利用这一点,可以通过ADMSC调节巨噬细胞的活化方向,改变局部组织中的炎症进程,从而达到治疗疾病的目的。同时,巨噬细胞活力的增加可以有效对抗其在炎症反应中的死亡,减少因巨噬细胞死亡而释放的大量促炎因子,减少类似瀑布效应的一系列反应的发生,从而更有效的对抗炎症反应。