论文部分内容阅读
目的： 在局部组织中，脂肪间充质干细胞(ADMSC)不仅因其干性具有组织再生功能，而且还具备促进创伤愈合，调节免疫的功能。而巨噬细胞的M2a及M2b/c型同样具有这样的功能。研究ADMSC对巨噬细胞活化方向的影响，可以了解ADMSC是否通过影响巨噬细胞来实现其在局部治疗中的功能，完善ADMSC移植治疗的机制研究，并为扩大ADMSC移植治疗的应用范围奠定理论基础。 方法： 提取C57BL/6小鼠的ADMSC及腹腔巨噬细胞，利用流式细胞仪鉴定这两种细胞。收集培养过第2代ADMSC24小时的培养液(ADMSC CM)用以诱导巨噬细胞。以未活化的巨噬细胞作为对照组;利用脂多糖(LPS)模拟局部炎症，诱导巨噬细胞24小时，使其活化为促炎的M1型巨噬细胞;同时利用IL-4、IL-13诱导巨噬细胞24小时，使其活化为M2型巨噬细胞。使用ADMSC CM分别诱导上述两种巨噬细胞，以及未活化的巨噬细胞48小时。观察各组巨噬细胞的形态变化，提取各组细胞的mRNA，总蛋白。利用流式细胞仪，实时荧光PCR，蛋白质印迹，免疫荧光等方法检测各型巨噬细胞的分类指标以确定其在ADMSCCM诱导后的活化方向。检测STAT3，STAT6，以及JNK通路的部分蛋白表达，以明确ADMSC CM影响巨噬细胞活化方向的具体机制。使用CCK-8检测巨噬细胞的活力。 结果： 巨噬细胞在经过ADMSC诱导后，细胞转为梭形，并出现细胞凸起，符合M2型巨噬细胞的形态学特点。未活化的巨噬细胞及M1型巨噬细胞向M2b/c型巨噬细胞转化。其M1型标志(iNOS，IL-12，CD197，P＜0.05)表达降低，M2a型标志(IL-27，IGF-1，P＜0.05)表达降低，M2b/c型标志（IL-10，SPHK-1，P＜0.05）表达升高。而对于IL-4及IL-13诱导出的M2型巨噬细胞，ADMSC似乎并未改变巨噬细胞的活化类型。在这一过程中，STAT3及其下游的SOCS3，STAT6及其下游的IRF4被激活，JNK通路被抑制(P＜0.05)。此外，巨噬细胞在被ADMSC诱导后，其细胞活力明显增加。 结论： ADMSC分泌的可溶性细胞因子，可将未活化的巨噬细胞及M1型的巨噬细胞诱导为调节型(M2b/c)巨噬细胞。STAT3，STAT6及JNK通路涉及这一改变。和IL-4及IL-13诱导的M2型巨噬细胞不同，ADMSC诱导的巨噬细胞并不降低Bax的表达，而是提高巨噬细胞的细胞活力。这一结果提示ADMSC对巨噬细胞活化方向的影响是ADMSC在局部组织中起到免疫调节功能可能的机制之一。利用这一点，可以通过ADMSC调节巨噬细胞的活化方向，改变局部组织中的炎症进程，从而达到治疗疾病的目的。同时，巨噬细胞活力的增加可以有效对抗其在炎症反应中的死亡，减少因巨噬细胞死亡而释放的大量促炎因子，减少类似瀑布效应的一系列反应的发生，从而更有效的对抗炎症反应。