【摘 要】
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目的:探究Kruppel-like Factor7（KLF7）在食管鳞状细胞癌细胞中发生发展的作用,为发现食管癌治疗靶点提供新的线索。方法:（1）利用Sangerbox生物信息学平台和GEPIA分析KLF7在不同癌症组织中的表达模式,以及在食管鳞癌患者中KLF7的表达与肿瘤病理分期和患者预后的关系;（2）用免疫组化检测汉族食管鳞癌患者癌组织和癌旁组织中KLF7的蛋白表达;（3）利用荧光素酶报告基因
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目的:探究Kruppel-like Factor7（KLF7）在食管鳞状细胞癌细胞中发生发展的作用,为发现食管癌治疗靶点提供新的线索。方法:（1）利用Sangerbox生物信息学平台和GEPIA分析KLF7在不同癌症组织中的表达模式,以及在食管鳞癌患者中KLF7的表达与肿瘤病理分期和患者预后的关系;（2）用免疫组化检测汉族食管鳞癌患者癌组织和癌旁组织中KLF7的蛋白表达;（3）利用荧光素酶报告基因实验验证KLF7在两种食管鳞癌细胞（Eca109、EC9706）的转录活性;（4）通过实时荧光定量PCR（q PCR）、Western blot与细胞免疫荧光技术研究正常食管上皮细胞（Het-1A）与食管癌细胞系Eca109、EC9706中KLF7的表达模式与亚细胞定位;（5）采用平板克隆计数和CCK8检测研究过表达KLF7和敲低KLF7后食管癌细胞的增殖能力;（6）利用Transwell分别研究过表达KLF7和敲低KLF7后食管癌细胞的迁移能力;（7）利用流式细胞术检测研究过表达KLF7和敲低KLF7后食管癌细胞增殖周期的变化;（8）分析KLF7与P21、P53和CCND1表达的相关性;（9）q PCR技术研究了过表达和敲低KLF7对食管癌细胞中P21、P53和CCND1的表达水平的影响。结果:（1）生物信息学分析结果显示KLF7在大多数癌组织中与相应正常组织中的表达存在显著差异;KLF7表达水平与食管癌患者的病理分期显著相关,但KLF7表达水平与食管癌患者的总体生存率无显著相关;（2）免疫组化结果显示KLF7表达水平在食管鳞癌组织与癌旁组织之间有显著差异,且在鳞癌组织中,KLF7大量表达于细胞浆,少量表达于在细胞核;在癌旁组织中,KLF7少量表达于细胞浆而细胞核几乎不表达;（3）荧光素酶报告基因显示人KLF7启动子在Eca109、EC9706中具有转录活性;（4）Western bolt结果显示KLF7在Eca109和EC9706与Het-1A中均有表达,并且食管癌细胞中KLF7的表达水平高于正常上皮细胞;（5）q PCR结果显示KLF7的4种转录本（NM＿003709、NM＿001270943、NM＿001270944和NM＿001270942）在正常食管上皮和食管癌细胞系中均有表达,但是没有发现它们的转录水平在正常食管上皮细胞系和食管癌细胞系中存在显著差异;（6）免疫荧光细胞化学染色技术结果显示,在食管癌细胞Eca109和EC9706细胞中,KLF7主要表达于细胞核,而在正常食管上皮细胞Het-1A细胞中,KLF7同时表达于细胞核和细胞质;（7）转染48h后,与EV组相比,过表达后KLF7蛋白表达水平明显升高;与NC组对比,转染KLF7-si RNA后KLF7表达水平明显降低;（8）CCK8法和平板克隆实验结果显示,与EV组相比,过表达KLF7后细胞增殖能力显著增加;与NC组对比,敲低KLF7后细胞的增殖能力显著降低;（9）流式细胞术结果显示,过表达KLF7与对照组相比G2期没有显著变化,S期显著减少,G0期显著增加;与对照组相比,敲低KLF7表达G0期显著降低,而S期和G2期显著增加;（10）GEPIA分析结果显示,在食管癌中KLF7表达与CCND1和P21表达具有相关性,在正常食管组织中,KLF7表达与P21和P53表达具有相关性;（11）q PCR检测结果显示,Eca109细胞中过表达KLF7后P53和CCND1表达水平显著增加,P21的表达未发现显著变化,敲低KLF7组,P21、P53和CCND1表达水平显著增加。结论:（1）KLF7在食管组织中表达;（2）KLF7在食管鳞癌细胞与正常上皮细胞的亚细胞定位不同;（3）KLF7在可能通过CCND1和P53调控食管鳞癌细胞的周期和增殖,影响食管癌细胞迁移进而影响食管癌的进展。
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