【摘 要】
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大苞荆芥（Nepeta bracteata Benth）是维吾尔医常用的药材,具有温肺平喘、祛寒止咳、消炎退肿等药理作用。大苞荆芥与硬尖神香草（Hyssopus cuspidatus Boriss）、神香草（Hyssopus officinalis L.）等外观性状极为相似,且其维吾尔名均为“祖发”,在维吾尔医常被混淆使用,导致同名异物现象,但其在性味归经及功能主治方面又存在较大差异。因此本实验以
【基金项目】
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“大苞荆芥（祖发）质量标准及DNA分子鉴定”（项目编号:202110）课题主持人:买买提江·阿布都瓦克副教授（新疆和田维吾尔医学专科学校）；
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大苞荆芥（Nepeta bracteata Benth）是维吾尔医常用的药材,具有温肺平喘、祛寒止咳、消炎退肿等药理作用。大苞荆芥与硬尖神香草（Hyssopus cuspidatus Boriss）、神香草（Hyssopus officinalis L.）等外观性状极为相似,且其维吾尔名均为“祖发”,在维吾尔医常被混淆使用,导致同名异物现象,但其在性味归经及功能主治方面又存在较大差异。因此本实验以大苞荆芥为实验材料,首先对其进行DNA条形码分子鉴定,继而开展大苞荆芥药材质量标准研究,以期为大苞荆芥的质量控制及临床安全合理应用提供保障。主要研究内容及结果如下:（1）比较5种与大苞荆芥同为唇形科的植物的性状形态学特征,利用DNA试剂盒快速提取5种植物实验样品的DNA基因组,PCR扩增DNA并进行双向测序,将测序结果导入美国国立生物技术信息中心（National Center of Biotechnology Information,NCBI）数据库进行序列比对,对实验样品DNA序列与NCBI相似性最高的序列进行序列分析、遗传距离分析、NJ树聚类分析,并绘制大苞荆芥的DNA条形码。结果显示总DNA提取成功,5种植物的ITS2序列均扩增成功,NCBI数据库比对结果显示,实验样品（DB-1）与大苞荆芥（Nepeta bracteata MG946842.1）单独聚为一支,支持率为99%,相似性为98.52%,两者DNA条形码基本相同较保守,说明两者是同一物种,各样品最大种内遗传距离（0.0048）明显小于最小种间遗传距离（0.1131）,存在明显隔阂。表明ITS2序列可用于鉴定大苞荆芥的基原,并可用于区分大苞荆芥与其混伪品硬尖神香草、神香草、裂叶荆芥、罗勒。从而为大苞荆芥DNA条形码数据库的建立、基原的鉴定及质量控制提供了依据。（2）基于多种化学试剂的定性反应,结合试管法与滤纸法对大苞荆芥水、乙醇、石油醚提取物进行系统预试验鉴别,初步判定大苞荆芥中存在的化学成分有挥发油、甾体或萜类、糖类、黄酮和酚类等。（3）对15批大苞荆芥药材照2020版《中国药典》方法进行性状、粉末鉴别及检查,采用薄层色谱法（TLC）鉴别木犀草素、芹菜素。结果详细描述出药材的性状和显微特征;确定大苞荆芥中水分、总灰分及酸不溶性灰分分别不得过12.00%、12.00%、3.00%;水溶性浸出物、醇溶性浸出物不得少于20.00%、17.00%。TLC荧光斑点清晰且特征性强。（4）采用HPLC法检测大苞荆芥中2个黄酮及其糖苷类成分的含量,其色谱条件为使用C18柱（250×4.6 mm,5μm）,以乙腈:0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为347 nm,流速1 m L/min,柱温30℃;优化了提取溶剂、溶剂加入量、提取时间等药材前处理方法;通过系统适用性试验,线性关系、检出限及定量限考察,精密度、重复性、稳定性及加标回收率试验,验证方法的适用性,并分别定量测定15批大苞荆芥药材中木犀草素、芹菜素及其糖苷木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷（LGCRP）、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷（AGCRP）的含量。结果显示木犀草素、芹菜素和LGCRP、AGCRP分别在3.080～12.321、4.753～19.010、5.67～22.68、9.97～39.86μg/m L范围内与各自峰面积呈良好的线性关系,r值均大于0.9993;检出限分别为0.11、0.08、0.03、0.03μg/m L,定量限分别为0.35、0.23、0.09、0.10μg/m L,精密度、稳定性和重复性均良好,加标回收率分别为101.06%、95.31%、95.98、95.00%。方法操作简便、灵敏度高、稳定性好、准确度高、适用性强,可用于大苞荆芥中2个黄酮及其糖苷类成分的定量测定,从而为大苞荆芥药材质量标准的制定提供了依据。
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